10酶的作用机制和酶的调节.pptVIP

ES复合物能形成，但ES不能太稳定 ES的去稳定依靠张力、形变、脱溶剂化和静电力等作用 1、底物与酶的邻近及定向效应 邻近效应：在酶促反应中，底物分子结合到酶的活性中心，形成中间复合物，催化基团与底物结合于同一分子而使底物在酶活性中心的有效浓度大大增加，有利于提高反应速度 定向效应：活性中心的立体结构和相关基团的诱导和定向作用，使底物分子的反应基团与酶的催化基团正确取位，使酶促反应具有高效率和专一性特点 2、底物分子形变和诱导契合 底物与酶结合诱导酶的分子构象变化，变化的酶分子又使底物分子的敏感键产生“张力”甚至“形变” ，从而促使酶－底物中间产物进入过渡态 一般而言，酶与底物的最适相互作用只发生在过渡态 3、酸碱催化 在酸碱催化中，酸碱促进质子转移，达到稳定过渡态降低反应活化能的作用 酸-碱催化可分为狭义的酸-碱催化和广义的酸-碱催化 广义酸－碱催化是指通过质子酸提供质子,或是通过质子碱接受质子的作用。酶参与的酸-碱催化反应一般都是广义的酸－碱催化方式 在细胞接近中性的pH条件下，酶的活性部位具有可以给出或接受质子的氨基酸侧链，为反应提供了一个相当于强酸或强碱溶液的微环境，从而加速反应的进行 蛋白质中的组氨酸、天冬氨酸和谷氨酸常充当酸碱催化剂 在大多数蛋白质中，组氨酸侧链咪唑基解离的pK值是6到7，所以它是一个在中性pH下用于质子转移的理想的基团。 His 残基的咪唑基是酶的酸碱催化作用中最活泼的一个催化功能团。 天冬氨酸和谷氨酸的羧基在某些酶中也可以充当酸碱催化剂，这些羧基解离的pKα值近似为4 溶菌酶中的酸碱催化 4、共价催化 反应过程中酶通过与底物形成反应活性很高的共价过渡产物，使反应活化能降低，从而提高反应速率 共价键一般都是通过催化剂上的亲核基团与底物上的亲电基团反应形成的。因此这种形式的催化也称为亲核催化 酶中参与共价催化的基团主要包括 His 的咪唑基，Cys 的巯基，Asp 的羧基，Ser 的羟基等 底物中的亲电中心包括磷酸基团、酰基和糖苷基团等 某些辅酶，如焦磷酸硫胺素和磷酸吡哆醛等也可以参与共价催化作用 5、金属离子催化 金属酶（metalloenzyme）：金属与酶结合紧密 金属激活酶（metal-activated enzyme）：金属和酶结合松散 金属在酶催化中的作用： 亲核催化，稳定反应中出现的增大的电子云或负电荷 提供中性pH环境中的亲核中心，电荷屏蔽作用是酶中金属离子的一个重要功能 多种激酶(磷酸转移酶)的底物是Mg2+－ATP复合物 6、活性部位微环境的影响 酶的活性中心是一个疏水的微环境 在这种非极性的微环境中带电基团间的静电作用显著提高 酶的催化基团和底物的作用力比极性环境强 影响酶活性中心催化基团的解离状态 * 酶促反应动力学 酶促反应动力学研究酶促反应速率以及影响此速率的各种因素 影响因素：底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等 *底物浓度对酶促反应速率的影响---米氏方程 Km 为米氏常数， 可近似表示酶与底物之间的亲和程度 Vmax为最大反应速率 当反应速率等于最大速率一半时,即V = 1/2 Vmax, Km = [S] 动力学曲线：v-[S]为双曲线 双倒数作图： 1/v-1/[S]为线性 抑制剂对酶促反应速率的影响 可逆抑制作用： 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性 不可逆抑制作用 抑制剂与酶的必需基团以共价键结合，引起酶的永久性失活，又称为修饰抑制。不能用透析、超滤等物理方法除去 可逆抑制 竞争性抑制 ：抑制剂的化学结构与底物相似，与底物竞争性的与酶的活性中心结合，导致Km增加，Vmax不变 非竞争性抑制 ：酶可同时与底物及抑制剂结合，引起酶分子构象变化，导致酶活性下降。Km不变，Vmax减小 反竞争性抑制 ：酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合，引起酶活性下降。Km和Vmax都减小 三种类型可逆抑制的比较 抑制类型 Vmax Km 动力学曲线 （不同[I]时的双倒数曲线） 竞争性抑制 不变 变大 相交于纵轴 非竞争性抑制 减小 不变 相交于横轴 反竞争性抑制 减小 减小 一组平行线 不可逆抑制剂 根据抑制剂的选择性不同 非专一性不可逆抑制：抑制剂作用于酶分子中的一类或几类基团，这些基团中包含了必需基团，因而引起酶失活 比如烷化剂能和酶活性中心的Cys或His结合而使酶失活 专一性不可逆抑制：专一作用于某一种酶活性部位的必需基团而导致酶的失活 专一性不可逆抑制剂 因抑制剂是底物类似物，和酶的结合