构建shRNA真核表达载体沉默NOTCH1基因对乳腺癌MCF7细胞增殖的影响.pdfVIP

构建shRNA真核表达载体沉默NOTCHl基因对乳腺癌MCF-7 细胞增殖的影响 摘要 术沉默Notchl基因表达对人乳腺癌MCF-7细胞生物学的影响。 i 扰序列，退火后分别克隆到含BamHI及HindⅢ双酶切位点的pGsensI表达载体 中，并进行双酶切、测序鉴定。用脂质体介导法将2个shRNA真表达载体分别转染 mRNA表达的变化，筛选出干扰效率最强的shRNA。将筛选出的干扰效率最强的 shRNA稳定转染到MCF一7细胞。运用RT-PCR、WesternBlotting及MTT分别检测 干扰阻断Notchl信号通路前后MCF-7细胞的RNA、蛋白质及细胞增殖的变化。 结果：重组质粒经BamI-II及Hind[[[双酶切后形成条带与预计值一致，插入序列 转染pGenesi 1一NOTCHl一shRNA2的干扰效果最强。将干扰效率最强的 0．05)。其中pGenesi ernBlott 细胞增殖状况，与对照组相比细胞增殖率降低(仄0．05)。 且有效的抑制了乳腺癌细胞中NOTCHl基因mRNA、蛋白表达和MCF-7细胞的增殖。 硕士研究生：王士兵(普通外科学) 指导教师： 王海波教授 关键词： MCF一7；siRNA；NOTCHl Constructofrecombinant shP矾A containing ing plasmids Notchlandtheeffectsonthe behavior silents biological ofMC卜7 Y233蠢ji：ji㈦。 J㈣嬲 Abstract theshRNA Notchleukaryoticexpression Objective：Bybuilding targetedgene smallinterferenceRNAinterferencesilence vector,discussed technologygene inhumanbreastcancerNotchlMCF一7cell expression biology． to 1 theGenebankforNOTCH the Methods：According genesequence，follow ofsiRNA 2interference principle designs，design sequence，afterannealing wereclonedtocontainBamHl andHindⅢdoublesites enzyme