HIV-1跨膜蛋白gp41在大肠杆菌中表达及纯化.pdfVIP

＼1 目 录 一、摘要 中文论著摘要…………………………………………………………………………1 英文论著摘要…………………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………8 三、论文 ’，．——l一 日U看………………………………………………………………………………………………………．．9 材料与方法……………………………………………………………………．10 实验结果…………………………………………………………………………20 讨论……………………………………………………………………………………………………．．32 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………34 五、参考文献………………………………………………………………………．35 六、附录 综述………………………………………………………………………………………………………37 在学期间科研成绩……………………………………………………………．5l 致谢………………………………………………………………………………………………………52 个人简历………………………………………………………………………．53 ·中文论著摘要· HIV-1跨膜蛋白gp41在大肠杆菌中的表达及纯化 刖 吾 1985年，法国巴斯德实验室从患者体内第一次分离出1种新的逆转录病毒， 随后将其命名人免疫缺陷病毒(Human ImmunodeficiencyVirus，HIV)，该病毒感染 所致的体内CD4+T细胞显著下降、发生机会感染及恶性疾病为特征的继发性免疫 Immuno 缺陷综合征，称之为免疫缺陷综合征(Acquired Syndrome． deficiency AIDS)。据卫生部统计，中国自1985年出现第一例艾滋病病人以来，截至2010 年11月底，累计报告艾滋病病毒感染者和病人37万余例。HIV是一种潜伏期极 长的逆转录病毒。根据血清学反应和病毒核酸序列测定，将HIV分为两型：HIV-I 型与HIV-2型。除少数源于西非的毒株外，几乎所有病例感染的都是HIV-1。在 HIV-1型内，根据包膜蛋白enV基因和壳蛋白的gag基因序列，进一步将其分为三 AE、CRF02AG、CRF03AB、 个基因亚型(组)以及14个流行重组型，包括CRF01 CRF05 DF等【21。而在我国东北地区，最常见为CRF01AE亚型【31。本文实验所 用的HIV-1型CRF 01AE亚型gp41．cDNA目的基因均来自中国医科大学附属第一 医院艾滋病研究所。 当今，实验室检测是诊断HIV感染的主要手段。常用的是ELISA法、免疫印迹 法(wB)、p24抗原检测及HIV抗体非传统的检测法。而这些检测方法的基本核心原 料则是HIV-1 gp41抗原蛋白，因此，拥有优质的HIV-1gp41抗原，对于HIV快速检测 品的研制起着举足轻重的地位。研究表明，艾滋病病人的血液、尿液和唾液中都 存在着HIV抗体，通过抗原．抗体的特异结合反应，达到检测品的检测原理。另外， 据最新报道，感染HIV病毒的各期病人尿液中均含有抗艾滋病病毒的抗体。因此， 用尿液代替血液检澳IJHIV抗体，为HⅣ诊断试剂的发展提供了新方向。采用尿液检 测的优势有：一、由于HIV感染者的尿液中仅含有HIV抗体，而不是有着传染性的 病毒本身，因此HIV不通过尿传播，可以安全地收集和运输尿样到实验室；二、 采样简便，可在任意时刻采取尿样检测，便于大规模筛查，无需针头取血，减少 医患之间传播的危险；三、尿液无需浓缩和预处理，抗HIV-1抗体可在尿液中长期 存在(