细胞内源PML-NB相关蛋白TTRAP的细胞学功能初探.pdfVIP

细胞内源PML-NB相关蛋白TTRAP细胞学功能初探 摘要 链霉菌噬菌体PhiC31整合酶介导的基因转运是一种相对安全的基因治疗方 法。为了解其在哺乳动物细胞中的整合机制和可能风险，研究其与细胞内源性蛋 白的互作是很有必要的。我们构建了pLexA-①C3l质粒用酵母双杂交的方法筛 的酵母配对实验和免疫共沉淀实验，我们证明TTRAP的N端和PKC3l的C 整合酶的整合效率得到提高；在外源PhiC31进入细胞后，可以对白介素·1激活 的NFKB活性产生明显的抑制作用，并且这种抑制作用与转染的PlliC3l表达 质粒量相关，呈现显著的剂量效应。 我们根据，I_I．RAP的独特细胞学定位将其鉴定为一种PML·NB核体相关蛋白。 与其他的核体蛋白类似的，TTRAP也与p53存在互作，并且通过酵母配对实验 著提高p53作为转录因子的活性，这表明TTRAP是与p53相关的转录共激活 蛋白。 最后，我们对’I-I’RAP的细胞学功能进行了初步的探索。们脚的长效表达 可以有效的抑制多种肿瘤细胞的克隆形成，而TTRAP本身并不会引起这些细胞 的凋亡或者周期阻滞；我们又构建了-I．：【’10心的突变体使其丧失作为磷酸二酯酶 的活性，而这些突变体也同时失去了抑制肿瘤细胞克隆形成的能力。这些证据表 明，．I-]脚的磷酸二酯酶活性对于其保持基因组稳定性，抑制肿瘤细胞克隆形 成是必要的。 关键词： 3 细胞内源PML-NB相关蛋白TTRAP细胞学功能初探 Abstract The mediated PhiC3 delivery isbelievedtobe gene byphage 1imtegrase withthe traditional method．Inorderto safer,compared gene’therapy elucidateits recombinationmechanismand riskwhile in potential applied mammalian isessentialtounderstandtheinteraction cells，it between PhiC31andcellular weconstructedand proteins．Here employedplasmid 1as to baitsceenthehumanfetalbraincDNA pLexA。①C3 and library establishedTTRAPasanovelcellular associatedwith西C31．The protein subsequent and further yeast。matingassayCo。immunoprecipitation verifiedthis interactionandrevealedthat N-termi