凝血酶在体外血栓制作中的应用：对降解时间的影响及其机制.pdfVIP

● 、j：l∑二、 f ＼ I㈣Y1吣8㈣0姒帆0帆3呲8妣3殴 目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………3 研究论文凝血酶在体外血栓制作中的应用：对降解时间的影响及其机制 ““”“””“”””“””““一一” 前言……”一””“””””“一“”·000日lJ吾”””””””“””””“一“”‘ 0一．．”“””“””…”一““…一”6 材料与方法………………………………………………………………6 结果···…···…·······…··············……··················…···一·……···10 附图····“”””一”””一”””””一””””“一””．．“”“一”“””””……11 附表……………………………………………………………………12 讨论···········································································…13 参考文献………………………………………………………………19 综述：血栓性疾病的诊断与EP一2104R的简介及应用……………………22 致 谢·······················································-···…………·…一·33 个人简历……………………………………………………………………34 摘 要 目的：体外溶栓试验是检测溶栓剂溶栓效率的重要手段。多种因素影 响溶栓效率，其中血栓的成分是重要因素之一，即溶栓效率随着血栓中交 联纤维蛋白含量的增加而降低，随着红细胞含量的增加而增加，二者中血 栓交联纤维蛋白含量的影响更重要。在既往报道中，用于溶栓实验的血栓 多为人或动物全血体外自然凝固形成，由大量的红细胞和稀疏的交联纤维 蛋白网构成，松软易碎，在生理盐水中浸泡数小时即可溶解，或被溶栓剂 降解的时间过短，不利于对其效率的检测，并可能是溶栓剂在临床上的实 际效率低于在实验条件下的原因之一。近年来，一些学者发现，在体外血 栓制作中应用凝血酶，能增强血栓的韧性，延长血栓的降解时间，从而克 服上述缺点。可能的机理是，凝血酶的应用使血栓的交联纤维蛋白含量增 加，但尚无直接证据。另外，目前应用凝血酶的报道较少，且所加浓度不 一，有必要探索一个最佳浓度，使血栓的制作规范化，提高体外溶栓效率 检测的可行性和的可比性。本实验观察体外血栓制作时凝血酶的应用浓度 对血栓溶解性的影响，及其机制是否在于改变血栓中的交联纤维蛋白含 量；在此基础上，对血浆纤维蛋白原水平与血栓中交联纤维蛋白含量进行 相关分析，探讨根据血浆纤维蛋白原水平预测血栓溶解性的价值。另外， 本研究首次提出一种精确测定血栓中交联纤维蛋白含量的方法，可望在血 栓学领域获得认可与应用。 方法：1．抽取红细胞比容40％．50％的健康人新鲜静脉血lOml，将每人 的血标本用注射器平分为5份；取其中4份，3份分别加入高(75I『／mI．)、 摇匀，置于37℃水浴箱中3dx时，使其凝固形成血栓。2．剩余的1份血标本， 应用Clauss法检测人血纤维蛋白原水平。3．将血栓从注射器中取出，观察 四组血栓之间机械性能的差别，包括弹性和塑性。4．每个血栓分别切取一 部分，修剪成重量为150mg的正方体，磷酸缓冲液冲洗后，置于纤溶酶溶 液中，在37℃水浴箱中孵育振荡，肉眼观察血栓降解过程。5．记录血栓降 解时间(包括血栓块消失时间和交联纤维蛋白絮状物消失时间)，离心， 中文摘要 取上清液，保存于．20℃。6．解冻上清液，用蒸馏水稀释，应用酶联免疫 法检测D-d二聚体浓度。7．根据D．d-聚体浓度计算血栓中交联纤维蛋白含 量。8．对4组血