亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的检测方法评价及人群调查.pdfVIP

医学研究杂志 2013年11月 第42卷 第11期 ·论 善 · 亚 甲基 四氢叶酸还原酶基因多态性的 检测方法评价及人群调查 许 慧 岳志刚 郑利民 范秀琴 贾 静 桑 华 蒋 莹 王 虹 黄 燕 摘 要 目的 对实时荧光定量 PCR方法 (FQ—PCR)检测亚甲基 四氢叶酸还原酶 (MTHFR)进行方法学评价 ，同时进行大 规模 的人群 MTHFRC677T基 因多态性调查 。方法 RT—PCR方法检测结果与测序法 比较来验证准确性 。将 同一份标本分 2O 天检测 20次，以cp值的变异来检测该方法的精密度 。用 FQ—PCR方法与聚合酶链反应 一限制性酶片段长度多态性 (PCR— RFLP)方法 同时检测 5O例患者 的MTHFRC677T基 因型进行方法学 比对 。验证 FQ—PCR方法 的线性范围。以FQ—PCR方法 对人群 MTHFRC677T基因多态性进行大规模调查 。结果 FQ—PCR方法与测序法 100％符合。批 内、批 间精密度 的变异系数 分别为 1．38％、1．48％。FQ—PCR在 6．2×10 ～6．2×10pg／l浓度范围内具有 良好的线性 。两种方法的比对结果没有统计学 差异 。人群调查发现 MTHFRC677T基 因型 CC、C／T、TT频率在男女性别 中分别为 41．8％ 、30．9％、27．3％和 38．3％ 、32．2％、 29．5％，等位基 因的频率分别为 57．2％、42．8％和 54．4％，45．6％。性别之间基因型频率和等位基 因频率没有统计学差异 。结论 FQ—PCR方法可以替代测序法和 PCR—RFLP方法 ，是一种快速 、便捷 、准确 、稳定 的检测 MTHFR基 因多态性 的方法 ，适用于大规 模 的检测 。 关键词 实时荧光定量 PCR 亚 甲基 四氢叶酸还原酶 基 因多态性 Evaluation oftheM ethodforPolym orphism ofM ethylenetetrahyDrooflateReductaseandSurvey theGeneFrequency in aM assivePopula- tion． XuHui，YueZhigang，ZhengLimin，FanXiuqin，JiaJing，SangHua，Jiang ，WangHong，HuangYan．LaboratoryDepart— ment，Be ngGeneralCoalHospital，Befing100028，China Abstract 0bjective Toevaluatethemethodofreal—timefluorescentqualitativePCRforpolymorphismofmethylenetetrahydrofo— latereductase(MTHFR)C677Tmutation．TosurveythegenerfequencyofMTHFRC677Tinamassivepopulation．Methods Sequen— cingwasperformedtoconfirm theaccuracyofFQ—PCR．Theprecisionwascheckedbydetectingthesamesample20timesinaperiodof 20daysandtheCpvaluewasusedtodescribethevariation．FQ—PCRandpolymerasechainreactionandrestrictionfragmentlengthpoly— morphism(PCR—RFLP)werecomparedbydetecting50samplesatthesametime．Thelinearitywasverified．Results TheresultsofFQ — PCRwerein fullconcordancewiththatofsequencing．ThemethodcoulddetecthumanDNA intherangeof6．2 ×10 一6．2×10pg／ LLlreaction．ThereisnosignificantdifferencebetweenFQ—PCRandPCR—RFLPmethod．Theinter—groupandintra—groupCVsofCp valuew