13甘油二酯乳脂对SD大鼠脂肪代谢的影响及其机制研究.pdfVIP

摘要 本文通过酶法甘油解对普通乳脂进行改性，制备 1,3-甘油二酯（1,3-DG）乳 脂，并通过 SD 大鼠饲养试验进行验证，探讨 1,3-DG 具有降脂减肥功效及其机 制，同时建立了SD 大鼠脂肪代谢相关基因相对表达量的检测方法。 1 PCR 检测方法的建立 建立运用 SYBR Green I 嵌合荧光染料定量检测 SD 大鼠脂肪代谢相关酶的 mRNA 的相对定量 PCR 检测方法，针对 SD 大鼠脂肪代谢中的乙酰辅酶 A 羧化酶 （ACC ），脂肪酸合成酶（FAS ），激素敏感酯酶（HSL ），肉碱棕榈酸转移酶-I （CPT-I）及管家基因β -actin 的序列设计了特异性的引物，建立 SYBR Green I 嵌合荧光法相对定量 PCR 检测方法。此方法无非特异性产物的产生；检测下限均 -6， 达 10 ；批内及批间变异系数均小于 2.8%，具有特异性强、敏感性高、重复性好 等特征．可用于 SD 大鼠肝脏脂类代谢相关基因 mRNA 表达量进行了检测。 2 甘油酯改性乳脂的制备 选用固定化脂肪酶 Lipozyme RM IM （EC3.1.1.3），全酶法甘油解无溶剂体系 中的乳脂，制备含有 1,3-DG 的甘油酯改性乳脂。反应时间为 16.51h，酶添加量为 6.41%，反应温度为 51.08℃，水分添加量为 4.35%，甘油和乳脂摩尔比为 1.33。 此时得到的反应产物中 1,3-DG 的含量为 30.21%。 3 SD 大鼠饲养试验 60 只 SD 大鼠随机分为基础对照组、低剂量改性乳脂组、中剂量改性乳脂组、 高剂量改性乳脂组、普通乳脂组，8 周的饲养试验后测定体重、血液生化指标及相 关基因相对表达量，结果表明： （1）用 1,3-DG 替代乳脂中的 TG 具有降低体重、血脂、血糖平均水平的功效，且 会使得血液游离脂肪酸增加。 （2）不具有调节总胆固醇代谢的功效，但其中 HDL-C 含量上升，LDL-C 含量下 降。 （3）1,3-DG 比 TG 可显著降低肝脏 FAS、ACC 的表达，使得脂肪酸的从头合成减 弱，减少脂肪积累；同时，1,3-DG 比TG 可显著增加 CPT-I 的表达量，从而促进脂 肪酸的β -氧化。对 HSL 的表达影响不显著。 关键词：1,3-DG， 脂肪代谢，酶，基因表达 I Abstract The present experiment was designed to study a process for milk fat containing 1,3- diacylglycerol(1,3-DG) by enzymatic glycerolysis, it was investigated the effect of modified milk on reducing lipid and obesity of rats, and a kind of analysis method for relative expressions of SD rats, fat metabolism-related genes was set up. 1 PCR detection method In this study the real-time PCR assays based on SYBR Green I chimerical fluorescence for relative expressions of SD rats, fat metabolism-related genes was established. FAS,ACC,HSL,CPT-I and β -actin was established with specific primes and probes for each gene. The results indicated that the assays were specific and highly sensitiv