L-鸟氨酸高产菌的原生质体融合育种.pdfVIP

氨基酸和生物资源 2009，31(1)：53～57 AminoAcids＆BioticResources L一鸟氨酸高产菌的原生质体融合育种 张婧芳，汪江波 ，黄金明，张 晶 (湖北工业大学生物工程学院，武汉430068) 摘要：以谷氨酸高产菌$9114和谷氨酸棒杆菌GS538为出发菌株，应用原生质体融合技术 ，定向选育出一株L一鸟氨酸高 产菌株RH169，该菌株能在发酵液中积累L一鸟氨酸，质量浓度可达 19．3g·L一。 关键词：谷氨酸棒杆菌 ；原生质体融合；L一鸟氨酸 中图分类号：Q939．9 文献标识码：A 文章编号：1006—8376(2009)01—0053—05 L一鸟氨酸 (L —ornithine)是一种重要的非蛋 K2HPO4 ·3H2O 1．4g、KH2PO40．6g、MgSO4 ·7H2O 白质组成氨基酸，以游离的形式存在于组织和细胞 0．02g、蒸馏水 100mL、琼脂粉2．0g，pH7．0—7．2， 中，具有重要的生理活性和功能 ¨，有很大的研究 0．75kg·cmI2蒸汽灭菌30min。 开发价值。通过诱变方法选育 L一鸟氨酸生产菌的 1．2．2完全培养基 报道较多 J，应用原生质体融合选育L一鸟氨酸高 葡萄糖 1．0g、蛋 白胨 1．0g、牛肉膏 1．0g、 产菌的研究较少。目前国际L一鸟氨酸产生菌的研 NaC10．5g、琼脂粉2．0g，pH7．0～7．2，定容至100 究仍以日本水平最高，2006年国内峰江氨基酸有限 mL，0．75kg·cm 蒸汽灭菌30min。 公司、三峡制药有限公司、四维氨基酸有限公司等多 1．2．3氨基酸补充培养基 家企业 申请了有关 L一鸟氨酸的产品生产资格，这 100mL基本培养基中添加 L一精氨酸 (L一精 也刺激了L一鸟氨酸需求量的增加 ，L一鸟氨酸的 氨酸经抽虑除菌后加入灭菌后的培养基)10mg而 生产方法和工艺 的研究 日益为研究者所关注 。 成，pH7．0—7．2，0．75kg·cm 蒸汽灭菌30min。 本文以分别带有不同遗传标记的谷氨酸棒杆菌 1．2．4再生完全培养基 GS538(Arg一+SG +D—Arg)和谷氨酸高产菌 在完全培养基 中加入丁二酸钠 135g，MgCI2 $9114为出发菌株，经原生质体融合定向选育出一 g，EDTA1．9g，DNAase5mg(G5细菌过滤器过滤后 株遗传性状稳定的L一鸟氨酸高产菌。该菌株在发 加入)，琼脂粉 2．0g，pH7．0～7．2，0．75kg ·CB 酵液中可积累L一鸟氨酸 19．3g·L～，较亲株谷氨 蒸汽灭菌 30min。 酸棒杆菌GS538(Arg一+SG +D—Arg)产酸提高 1．2．5选择培养基 了8．2％。此外，由于所选育菌种具备精氨酸缺陷 补充培养基 +5％D—Arg 型标记，有利于提高L一鸟氨酸的提取收率和精度。 完全培养基 +0．1％磺胺胍 1．2．6种子培养基 1 材料与方法 葡萄糖 3．0g、尿素 0．6g-．K2HPO40．1g、玉米浆 1．1 菌种 3．0g、MgSO40．04 g、FeSO40．02 g、MnSO40．02 g、 谷氨酸棒 杆菌 (Corynebacterium glutamicum) pH7．0—7．2，定容至 100mL，0．75kg·cm 灭菌30 GC，谷氨酸高产菌 $9114，均为湖北工业大学微生物 rain。 实验室保藏菌种，谷氨酸棒杆菌 GS538(Arg一+