白色念珠菌磷脂酶与其毒力因子、耐药性及基因多态性的关系研究.pdf

摘 要 背景与目的白色念珠菌的毒力因子主要包括：细胞表面粘附结构、利于侵入的 酶(天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶)、表型转换等。宿主细胞膜中的主要成分磷脂， 可被白色念珠菌分泌的磷脂酶所分解，白色念珠菌通过完整性受损的细胞膜侵入 宿主细胞。目前，还不清楚磷脂酶和白色念珠菌其他毒力因子之问存在怎样的关 系，因此，本实验检测临床分离的白色念珠菌磷脂酶活性，将其分为磷脂酶高活 性组和磷脂酶低活性组，探讨磷脂酶与菌株其他毒力因子(溶血活性、细胞表面 疏水性、粘附颊粘膜上皮细胞)、耐药性及基因多态性之问的关系，从而对深入 了解磷脂酶征白色念珠菌致病性和耐药性中的作用提供实验依据，为抗真菌药物 的研制及白色念珠菌的诊断和治疗奠定理论基础。 方法采用蛋黄平板法对80株白色念珠菌的磷脂酶活性进行检测，以PZ值表示 磷脂酶活性，根据菌株PZ值，选出磷脂酶活性较高和磷脂酶活性较低的菌株各 10株，分为两组。比较两组的溶血活性、细胞表面疏水性、粘附颊粘膜上皮细 胞能力的差异，分析白色念珠菌磷脂酶与上述三种毒力因子之问的关联性；同时 进行药物敏感性榆测，比较两组IBJ耐药性的差异；提取菌株DNA，应用随机扩 增多态性DNA(RAPD)技术分析两组的基凶型特征。 结果从l‰脒分离的80株白色念珠菌中，78株可以分泌磷脂酶，磷脂酶阳性检 出率为97．5％，其PZ值的范围为O．5661．000，A组PZ均值为0．639±0．043， 细胞表面疏水性均无显著性差异(pO．05)，菌株磷脂酶活性与溶血活性、细胞 附力有显著性差异(pO．05)，A组菌株对颊粘膜一I-皮细胞的粘附力显著强于B 药物的耐药一陆叫‘五／1：lrd，A组中对益康l蜂刷药率为70％，对咪康唑、氟康哗、伊 曲康畔也有r}J敏或栉耐药情况；而B组中对击矗康哗耐药牢仅为10％，对其余的6 种药物均敏感。RAPD结果显示，除B组中两株磷脂酶卧}，t的菌株显示为独特的 琏}人l{弘外，剩余A、B两组∞株一卜嘤条拼}的数t．t扛1和f移‘起芹片较小，扫：1300 bp处 均¨尔‘I：’打‘’己心条雀，，仵1500 bp处行ll!／J：仃3条兜俯，j选f‘十¨似系数化0．500～ 1．000之I’I|J，曲川闲株坫洲多态。Fl：尤|¨j娃斧片。 结论临床分离的白色念珠菌多数可以产生磷脂酶，说明磷脂酶是白色念珠荫重 要的毒力因子；其活性与菌株的粘附力有一定的相关性，但与菌株的溶血活性、 细胞表面疏水性并没有直接的相关，磷脂酶活性不能直接反应菌株其他毒力因子 的情况；磷脂酶活性高的菌株其耐药性也随之增强，表明磷脂酶和耐药有～定的 相关性；基因多态性不能直接反应磷脂酶活性的强弱，说明基因多态性是对包括 溶血活性、细胞表面疏水性、粘附力及耐药等特征的一个综合反映，不只简单地 反映磷脂酶这一单一的毒力特征。 关键词白色念珠菌；磷脂酶活性；毒力因子；耐药；基因多态性 Abstract PutativevirulencefactorsofCandidaalbicansinclude：cellwall Objiective adhesins， of secretion hydrolyticenzymes(secretedaspartyl in the of switching．Thephospholipasesgeneralcatalysehydrolysis phenotypic are ofallcell thenC phospholipids，whichmajorcomponents membranes，and albicansfromthe isnotclearthatassociation cell．However,it entry