体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建.pdfVIP

第5卷 第4期 器官移植 V01．5 No．4 2014年 7月 OrganTransplantation Ju1．2014 实验 研 究 · 体外 L02肝细胞氧化损伤模型的构建 赵辉 孟炜 易述红 陈规划 【摘要】 目的 探讨L02肝细胞氧化损伤模型的构建方法。方法 将L02肝细胞培养后分为损 伤3h组 、6h组和 12h组 ，每组再根据加入不同浓度 的过氧化氢 (H0)分为 100、200、300、 500、750、1000Ixmol／L6个亚组，对照组不加入HO ，分别在培养箱中继续孵育3h、6h或 12h后 进行细胞计数试剂盒 (CCK)一8检测。另 1组 L02肝细胞培养后分为损伤3h组 、6h组和 12h组， 损伤 3h组再根据加入H，0，浓度不同分为 100、200、300、500、750Ixmol／L5个亚组，损伤6h组分 为 1O0、200、300、500l,zmol／L4个亚组 ，损伤 12h组分为 100、200、300Ixmol／L3个亚组 ，对照组 不加入HO ，分别在培养箱中继续孵育3h、6h或 12h后进行AnnexinV一异硫氰酸荧光素 (FITC)／ 碘化丙啶 (PI)双染流式细胞检测。损伤模 型的建立及鉴定 ：L02肝细胞培养后损伤组加入 200txmol／LHO ，对照组不加入HO。在培养箱中继续孵育6h后检测细胞线粒体膜电位 、丙二醛 (MDA)、活性氧 自由基 (ROS)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙氨酸转氨酶 (ALT)、天冬氨酸转氨酶 (Asrr)等指标。结果 损伤3h组中，200、300、500、750、1000Ixmol／L等各亚组的细胞存活率与 对照组比较，差异有统计学意义 (均为P0．O1)；损伤6h组中，各亚组细胞存活率与对照组比较差 异均有统计学意义 (均为P0．01)；损伤 12h组中，各亚组存活率与对照组比较差异均有统计学意 义 (均为P0．01)。3hH，O，浓度与细胞存活率的相关系数为一0．993，6h组为一0．955，12h组为 一 0．819。AnnexinV—FITC／PI双染检测不同浓度、不同作用时间的H0 损伤情况下细胞凋亡／坏死 率：损伤3、6、12h组中，损伤各亚组与对照组比较，差异均有统计学意义 (均为P0．01)。3h组 H，0，浓度与细胞凋亡或坏死率的相关系数为0．97l，6h组为 0．992，12h组为 0．986。与对照组 比 较，200b~mol／IH，0，作用 6h处理 L02肝细胞损伤组的线粒体膜 电位、MDA、ROS、SOD、ALT、 AST差异均有统计学意义 (均为P0．01)。结论 200pmlol／LH。0 作用6h处理L02肝细胞是体外 模拟缺血一再灌注或氧化损伤的良好模型。 【关键词】 肝细胞；氧化损伤；缺血一再灌注损伤；凋亡 【中图分类号】R617 【文献标志码】A 【文章编号】1674-7445(2014)04—0010—06 EstablishingamodelofoxidativedamageofL02hepatocytesinvitro ZhaoHut，MengWet，YiShuhong， ChenGuihua．DepartmentofHepatobiliarySurgery，theThirdAffiliatedHospitalof SunYat—senUniversity， Guangzhou510630，China CorresTmndingauthor：YiShuhong，Email：yishuhong@163．coin A【bstract】 Objective ToinvestigatethemethodofestablishingamodelofoxidativedamageofL02 hepatocytes．M ethods L02 hepatocyteswerecultured dividedinto3 hdamagegroup，6 hgroupand 12 h group．Eachgroup wasdivided into6 subgroupsaccordingtodifferentc