重组人谷氧还蛋白1在大肠杆菌中表达条件的优化、纯化及活性检测.pdfVIP

维普资讯 第 10卷 第 3期 生 命 科 学 研 究 、0l_10No 3 2006，十9月 “ ScdenceResearch Sep．2006 重组人谷氧还蛋白1在大肠杆菌中表达条件的 优化、纯化及活性检测 刘莹莹，邹朝霞，周宏博，吴莉芳，房绍红 (哈尔滨医科大学 生物化学与分子生物学教研室，中国黑龙江 哈尔滨 150086) 摘 要：为进一步研究谷氧还蛋 白 1(Grx1)的生物学功能及作用机制，将 已构建的 pRSETA—Grxl融合蛋 白表达 载体在大肠杆菌 BL21(DE3)菌株 中表达 ，并优化表达条件 ，用 SDS—PAGE和凝胶影像分析 ．结果表 明，当茵体 密度 ODooo为 1．0时开始诱导 ，加入终浓度 0．5mmol／LI G，37cc，110±5r／rain振 荡培养 5h，重组蛋 白为 可溶性 ，表达量达30％以上 ．用Ni—NTA树脂亲和层析纯化重组蛋 白，获得蛋 白质纯度达90％以上 ；westem 印 迹结果表 明，该蛋 白具有免疫活性 ；Mrr结果显示，终浓度为 10mg／LGrxl重组蛋 白具有保护细胞抵御 500 LLmol／LH2O2作用 (PO．01)． 关键词 ：pRSETA．Grx1；表达条件优化：纯化 中图分类号 ：Q782 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007．7847(2006)03—0228—05 TheOptimizationofExpressionCondition，PurificationandActivity Analysisof Recombination HumanGlutaredoxin1in E．coli LIUYing—ying，Z0U Chao—xia，ZHOU Hong—bo，WU Li—fang，FANG Shao—hong (DepartmentofBiochemist~andMolecularBiolog)．HarbinMedicalUniversit)，Harbin150086，Heilong]iang，China1 Abstract：In ordertostudythebiologicalfunctionand mechanism OIhumanGrx1further，therecombinant plasmidpRSETA—Grxl(rhGrx1)constructedbyourgrouppreviouslyweretransformedintothehostE．coli BL21(DE3)，andtheexpressionconditionofrhGrx1wereoptimizedinthistest．WhenrhGrx1expressionwas inducedatOD6ooof1．0with0．5mmol／LIPTG for5hat37。=【withtheshakingspeedof110±5r／min．the maximum amountsofsolubleproteinswereobtainedandtheyieldwasmorethan30％ ofthetotalmassof bacterialproteins．Then，therecombinantproteinswerepurifiedbyNi—NTA resinandproteinamountswele‘ morethan90％ ．ThewesternblottingindicatedthattherhGrx1proteinexpressedtheimmunologicalactM ty． Inaddition．M1TrassayshowedthatrhGrxlproteinhadantioxidantfunction． Keywords：pRSETA—Grxl；theoptimizationofexpressionc