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第 17卷第 6 期 激 光 生 物 学 报 Vol. 17 N o. 6
2008年 12 月 A CTA LA SER B IOLO GY SIN ICA D ec. 2008
·技术研究 ·
结合单酶切位点的融合 PCR 技术对
S CN 1A 基因的定点诱变
龙跃生 , 蔡阳林 , 赵绮华 , 廖卫平
(广州医学院第二附属医院神经科学研究所 , 广东 广州 5 10260)
摘 要 : 目的 :利用结合单酶切位点的融合 PCR 技术对癫痫相关基因 S CN 1A 进行定点突变 。方法 :首先设计
两对引物 PF 1 / PR 1和 PF2 / PR2 , PF 1和 PR2 均位于突变位点最近的单酶切位点处 ,而突变位点设计在第一对反
( ) ( )
向引物 PR 1 和第二对正向引物上 PF2 。通过重叠延伸法两次 PCR 扩增 :第一次用 PF 1 / PR 1和 PF2 / PR2 分
开扩增 , 以扩增产物作模板 , PF 1 / PR2 作引物进行融合 PCR ,得到的扩增产物即含有所需要的突变位点 ,最后将
扩增片段克隆入 pMD 18T载体 ,经测序筛选阳性克隆 。结果 : DNA 测序表明 S CN 1A 基因所编码的第 946 位密
( ) ( )
码子由精氨酸 A rg 突变为组氨酸 H is ,再通过酶切和连接反应将重组质粒上的突变片段替换 S CN 1A 表达质
粒上的对应片段 ,成功构建了 S CN 1A 突变载体 。结论 :与现在常用的长距离 PCR 定点诱导突变相比较 ,结合单
酶切位点的融合 PCR 定点突变技术具备扩增距离短的优点 ,大大降低了自发突变的概率 ,适合于大肠杆菌中易
自发突变的较大载体的定点诱变 。
关键词 :融合 PCR ; 定点诱变 ; S CN 1A ; 癫痫
中图分类号 : R 742
文献标识码 : A
文章编号 : 10077 146 ( 2008) 06 0824 05
S ited irected M utagen e sis of SCN 1A Gen e in v itro U sin g
Fu sion PC R C oup lin g M on oclon in g S ite s
L ON G Yuesheng, CA I Yang lin, ZHA O Q ihua, L IA O W eip ing
( In stitu te of N eu ro sc ience and the Second A ffiliated Ho sp ital, Guangzhou M ed ical Co llege,
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