利用噬菌体抗体库筛选U251细胞血清应答基因蛋白特异抗体.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( )! *’ ) # 年 月 !$ % !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,- !$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 利用噬菌体抗体库筛选!#$ 细胞血清应答基因蛋白特异抗体 余 敏 谭德勇 钱 伟 赖建华 孙桂林 （云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室，昆明1%A/） 摘 要 利用噬菌体表面展示抗体库对不同血清处理B!%/ 细胞吸附的抗体进行差异筛选，筛选获得血清饥饿细 胞吸附的阳性噬菌体克隆 个和血清饥饿后恢复血清培养细胞吸附的阳性噬菌体克隆 个。细胞免疫组化检测 A1 2! 发现应答反应差异较大的抗体 个，即血清饥饿培养细胞特异反应的抗体 个（ 号抗体）和血清饥饿后恢复血清 ! / // 培养细胞特异反应的抗体 个（号抗体），其中 号抗体在恢复血清培养细胞中的应答反应强于血清饥饿培养细 / ! ! 胞，是一个血清应答基因蛋白特异抗体，且在血清饥饿后恢复血清培养不同时间的B!%/ 细胞中具有一定的特异性 反应。该研究为寻找与细胞周期调控有关的因子奠定了基础，同时对肿瘤的诊断和治疗研究也有重要意义。 关键词 噬菌体抗体库， 细胞，血清应答基因蛋白特异抗体 B!%/ 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） 302 C /.#1/ !$ #.#%1.% 抗体库技术是近 多年来发展起来的一种新 加入血清后即可启动休止状态的细胞进入细胞周 / ［，］ 技术，它包含免疫球蛋白可变区重组产生的各种抗 期# $ 。本研究以血清敏感细胞B!%/ 为材料，利用 体的总和。/A2A 年D,EF 等首先用重链可变区组成 噬菌体抗体库对不同血清处理细胞吸附的抗体进行 单链抗体库，同年 G?6 等用 HIJ 技术建立了全套 差异筛选，试图获得血清应答基因蛋白特异抗体。 抗体轻链库和全套重链 段基因库。 年，研 7F /AA/ 利用这些抗体可能找到与细胞周期调控有关的因 究者们将噬菌体表面递呈技术引入抗体库的构建， 子，这一研究对于细胞周期调控机制的研究及肿瘤 ［，］ 出现了噬菌体抗体库/ ! 。由于噬菌体抗体库具有 的诊断和治疗研究都有重要意义。 高通量筛选，特异性强、实验周期短的特点，目前被 $ 材料与方法 广泛应用于疾病的诊断治疗和药物设计中。 抗体库的产生过程是将未免疫小鼠的脾脏组织 $% $ 材料 取出，将成熟的免疫球蛋白基因的可变区通过HIJ 人脑胶质瘤细胞株B!%/ 由重庆医科大学范维 技术进行扩增，然后将这些扩增产物重组于表达载 珂教授提供，噬菌体表面展示抗体4@7M 库由上海生 体上，形成一个免疫球蛋白可变区的文库。由于小