DNA错配修复基因mutS的高效表达及表达产物活性鉴定.pdfVIP

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2017-09-02 发布于重庆
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DNA错配修复基因mutS的高效表达及表达产物活性鉴定.pdf

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卷期生物工程学报 ! # ’() * ! +( *# 年月 $%%$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-./-01-2 $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !# 错配修复基因!#$ 的高效表达及表达产物活性鉴定， ! $ ! ! ! $ M 毕利军周亚凤邓教宇张先恩张成刚 IB/A(BJ * K * 7LL ! （中国科学院武汉病毒所，武汉 4M%%:!） $ （中国科学院沈阳应用生态研究所，沈阳 !!%%!# ） M （，，，，，） N?(HA-0?L/2J O-.2/0-B/ P0.-2?) 7())-C- (Q ,H?-BH- 9-AHAB()(CJ R S-T?H?B- U(BT(B ,V:$IW X6 摘要将错配修复基因（）克隆于分泌型原核表达载体（）上，以端融合个组氨酸的 O+I 3)/4 $ Y#5Z1 .9M$ [ + 5 形式在（）中进行了诱导表达。分析证实有一与预期分子量相应的诱导表达条 5 * 0(,# IO44 OM P\9K ,O,3\IK 带，其表达量占全菌蛋白质的 $ [ 左右，且表达蛋白以可溶形式存在。利用固定化金属离子（）配体亲和层析 M# ] +? 柱纯化目的蛋白，其纯度为% ] 以上。与含有错配碱基O+I 双链的结合反应证明该蛋白具有特异性识别、结合含有错配碱基O+I 双链的生物活性。关键词错配修复基因3)/4 ，表达，纯化，鉴定中图分类号文献标识码文章编号（） ^: I !%%%3M%5! $%%$ %#3%#M53%# 错配修复（，）是细胞复学博士馈赠。 O+I S?L0/HA 2-.?2 SS_ 制后的一种修复机制，具有维持复制保真度，生化试剂：聚合酶、限制酶及 O+I $% $% O+I 94 O+I 控制基因变异的作用。该系统首先是在原核生物大连接酶为9Z2 和,BC(B 公司产品。氨苄青霉素、［］［］ ! ‘ 4 # ‘ : 卡那霉素、（牛血清白蛋白）、（异丙基硫代肠