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1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序 主要是编码蛋白质的结构基因 原核细胞的基因结构 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 启动子与终止子 cDNA合成过程 第一步,反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA单链,形成RNA-DNA杂交分子。 第二步,核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解,使之变成单链的DNA。 第三步,以单链DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链,形成双链DNA分子。 基因组文库和部分基因文库 * 1.目的基因的获取 2.基因表达载体的构建 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 现代获取方法: 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、人工合成 初始目的基因的来源 从生物中直接获取 人工合成 外显子 内含子 与RNA聚合酶结合位点 编码区 非编码区 非编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶结合位点 编码区 原核生物基因 真核生物基因 原核细胞基因 编码区(编码序列):能指导有关蛋白质的合成,即能够编码蛋白质 非编码区(调控序列):位于编码区上游和编码区下游的DNA序列,虽不能指导有关蛋白质的合成,但有调控遗传信息表达的核苷酸序列,如启动子、终止子等 RNA聚合酶的作用是催化DNA转录为RNA。它能够识别调控序列中的结合位点,并与其结合。转录开始后,RNA聚合酶沿DNA分子移动,并与DNA分子的一条链为模板合成RNA。 与原核细胞比较,真核细胞基因结构的主要特点是: 编码区是间隔的、不连续的。也就是说,能够编码蛋白质的序列被不能够编码蛋白质的序列分隔开来,成为一种断裂的形式。 其中,能够编码蛋白质的序列叫做外显子,一般不能够编码蛋白质的序列叫做内含子。 真核细胞基因 编码区 (间隔、不连续) 外显子:能编码蛋白质的DNA序列 内含子:不能编码蛋白质的DNA序列 非编码区:与原核生物具有相似功能的启动子、终止子 都由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成的 相同点 编码区是间隔的、不连续的 编码区是 连续的 不同点 真核细胞 原核细胞 启动子是在非编码区内紧靠转录起点,调控遗传信息表达的脱氧核苷酸序列,它能引导RNA聚合酶与正确的基因部位结合,使转录从起点开始,沿编码区进行。 终止子是在非编码区内紧靠转录终点,调控遗传信息表达的脱氧核苷酸序列,它能阻碍RNA聚合酶的移动,并使其从DNA模板链上脱离下来,使转录终止。 什么是内含子和外显子? 原核细胞基因的编码区是连续的, 真核细胞基因的编码区是间隔的、不连续的. 真核生物基因的结构特点是:“编码区是间隔的、不连续的。”也就是说:能够编码蛋白质的序列被不能编码蛋白质的序列分隔开来,成为一种断裂的形式。其中,能够编码蛋白质的序列叫外显子,不能编码蛋白质的序列叫内含子。在成熟mRNA被保留下来的基因部分被称为外显子。 真核基因包括编码区和非编码区,编码区又分为外显子和内含子,内含子不翻译蛋白质。 知识拓展 关于内含子和外显子的说法正确的是 ( ) A .内含子和外显子在转录的过程中都能够转录成成熟的mRNAB.只有外显子能够转录成mRNA,tRNA,rRNAC.原核细胞基因中也有内含子和外显子D.由于内含子不能编码蛋白质,故它属于非编码区 知识拓展 B 目的基因的获得 从基因文库获得 基因文库 利用PCR技术扩增 人工合成 基因组文库 部分基因文库 已知序列 未知序列 目前被较广泛提取使用的目的基因有:苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 基因操作的基本步骤 一、提取目的基因—— 将需要的基因从供体生物 的细胞内提取出来。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 获取目的基因的方法: 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 (cDNA文库) 寻根问底—— (1)为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗? 提示:构建基因文库是获取目的基因的方法之一,并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知,就可以通过PCR方式从含有该基因的生物的DNA中,直接获得,也可以通过反转录,用PCR方式从mRNA中获得,不一定要构建基因文库。但如果所需要的目的基因的序列
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