支气管败血波氏杆菌外膜蛋白的提取及其免疫效果的检测.pdfVIP

维普资讯 微生物学通报 SEP2O，2008，35(9)：1426-1432 M icrobiology @ 2008byInstituteofM icrobiology．CAS tongbao@ im．ac．cn 支气管败血波氏杆菌外膜蛋白的提取 及其免疫效果的检测 肖海君 闫振贵 崔金生 刘冠华 王小娥 杨春晓 朱瑞良 (山东农业大学动物科技学院 泰安 271018) 摘 要：本研究以小鼠为实验动物模型，研究支气管败血波氏杆菌的外膜蛋白(OMP)和其中的有 效保护抗原成分(OMP68)的免疫原性及免疫保护作用。本研究利用改进的Wooldridge的方法提取 了支气管败血波氏杆菌 P11和 P13的 OMP，利用 SDS．PAGE 比较 了 2株之 间差异，采用 Western．blotting进行了分析并确定了P13菌株 OMP(P13一OMP)中的有效保护性抗原成分，采用电 洗脱方法获的分子量为68kD的P13～OMP有效保护抗原成分(OMP68)，然后制备 了油乳剂P13的 全茵、P13．OMP和 OMP68免疫抗原 。抗体动态变化：将清洁级小鼠70只随机分成 7组，10只／ 组，用油乳剂P13的全菌和不同剂量的P13一OMP和 OMP68免疫抗原分别免疫，采用间接 ELISA 检测免疫小鼠的相应抗体水平并分析抗体动态变化；主动免疫保护试验：将清洁级小鼠 80只随 机分成 8组，1O只／组，分别采用制备的油乳剂 P13一OMP(OMP25 g／Z)、OMP68(25 g，只)和 P13菌体免疫抗原在免疫 10d后，分别用 100LD50的P11和PI3腹腔攻毒，然后统计保护率并分 析免疫原所提供的免疫保护力。免疫P13一OMP弄口OMP68油乳剂抗原后，7d时，抗体水平开始逐 渐上升，42d时，抗体水平分别达到2 和2H～，然后逐渐下降，70d时，抗体水平分别达到2·和 2一。主动免疫时，Pll和 P13攻毒的P13．OMP免疫组分别均得到9／10和9／10的保护，OMP68免 疫组分别均得到9／10和 10／10的保护，而P13全菌免疫组分别得到4／10和6／10保护，对照组全部 死亡。P13一OMP和 OMP68抗原均具有良好的免疫原性和免疫保护作用，为支气管败血波氏杆菌 OMP亚单位疫苗的研制奠定了良好的理论基础。 关键词：支气管败血波氏杆菌，小鼠，外膜蛋白，免疫原性 ExtractionandDetectonImmunizationofOuterM embrane ProteinofBordetellabronchiseptica XIAOHai．Jun YAN Zhen—Gui CUIJin—Sheng LIU Guan—Hua WANG Xiao—E YANG Chun．Xiao ZHU Rui—Liang (CollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，ShandongAgriculturalUniversity，Tai’an271018) Abstract：InordertoevaluatetheimmunogenicityandhteirprotectionofoutermembraneproteinofBor- detellabronchisepticaandeffectivenatibody(OMP68，weestablishedamicemode1．Theresearchimproved 基金项 目：国家 自然科学基金(NoNo；山东省自然科学基金项 目(No．Y2006D09)资助 }通讯作者：Tel：0538—8242341；函=zhurl@sdau．edu．cn