利用酿酒酵母转座子文库筛选线粒体镁代谢相关基因.pdfVIP

Re s e arch P ap ers 研究报告 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2010, 37(1): 36~41 利用酿酒酵母转座子文库筛选线粒体 镁代谢相关基因* ** 王 娟 范强旺 周 兵 (清华大学生物科学与技术系，北京100084) 摘要 镁离子对于维持细胞正常功能十分重要，糖尿病、高血压、慢性呼吸道疾病、骨质疏松、心律失常等多种疾病都与镁 代谢失衡有关． 基因编码线粒体镁离子转运蛋白， 缺失会导致酵母线粒体镁离子浓度下降、线粒体内 型内含 MRS2 MRS2 Ⅱ 子剪接缺陷和非发酵碳源培养基上的生长缺陷．为了增进对线粒体镁离子代谢调控基因的了解，利用酿酒酵母 mTn-lacZ/LEU2 转座子文库筛选MRS2 的抑制基因，发现线粒体载体家族成员YMR166C 基因的缺失可以挽救MRS2 基因缺 失突变体的生长缺陷、 Ⅱ型内含子剪接缺陷，并可以调节线粒体镁离子浓度，首次发现YMR166C 是线粒体镁代谢相关基因. 关键词 酵母，筛选，镁，线粒体 学科分类号 Q75 ，Q36 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00284 镁是人体细胞内的主要阳离子，作为多种酶的 激活剂，参与300 多种酶促反应，参与能量代谢、 1 材料和方法 蛋白质和核酸合成、细胞周期调控以及离子代谢等 1.1 菌株 诸多生理活动，因此镁对维持组织细胞的正常功能 本文所用的酿酒酵母菌株见表 1 ． 酵母 十分重要．现已发现镁代谢失衡会导致糖尿病、高 血压、慢性呼吸道疾病、肾脏钙质沉积、骨质疏 Saccharomyces cerevisiae 野生型菌株BY4742. mrs2Δ [1-2] 突变体和ymr166cΔ 突变体购自Invitrogen 公司酵 松、心律失常等多种疾病 ．但是，目前对细胞 母敲除文库．mrs2Δ ymr166cΔ 双突变体为本实验 维持镁离子代谢平衡的机制、镁离子在各细胞器内 [3-4] 室制备． 的分布和调控机理等方面的了解还很少 ． 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为最简单 的真核生物，已完成全基因组测序，遗传学手段丰 Table 1 S． cerevisiae strains used in this study 富，操作简单易行，是研究基因功能理想的模式生 Strain Genotype 物．在酵母中已经发现MRS2 基因编码线粒体镁离 BY4742 MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ 0 子转运蛋白，且MRS2 基因的敲除会导致酵母线粒 mrs2Δ MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0 mrs2:: kanMX 体镁离子浓度降低、在非发酵型培养基上的生长缺 ymr166cΔ MATα his