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网络出版时间：2014-08-21 10:35
网络出版地址：/kcms/doi/10.11844/cjcb.2014.09.0073.html
中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2014, 36(9): DOI: 10.11844/cj cb.2014.09.0073
人RARα基因重组腺病毒表达质粒的构建及其对
人白血病NB4细胞的影响研究
1,2 2 2 2 2 2 1,2*
蒋开玲 钟 梁 阳小群 王 慧 马鹏鹏 朱新瑜 刘北忠
1
( 重庆医科大学附属永川医院中心实验室, 重庆 402 160;
2重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆 400016)
摘要 利用AdEasy 系统构建携带人RARα基因的重组腺病毒表达质粒, 感染NB4细胞后用生
理浓度的维甲酸诱导, 观察其对人白血病NB4 细胞增殖和分化的影响。以急性早幼粒细胞株NB4
的cDNA为模板, PCR扩增RARα基因, 克隆至穿梭质粒pAdTrace-TO4 中, 构建重组腺病毒穿梭质粒
α Eco Sal
pAdTrace-TO4-RAR 。用 R V和 I双酶切及测序鉴定, 然后与骨架质粒AdEasy-1同时转化大
肠杆菌BJ5183菌株的感受态, 经同源重组获得重组腺病毒质粒Ad-RARα。酶切验证后, Pac I酶线
性化后转染AD293细胞, 包装出重组腺病毒Ad-RARα, 经3轮扩增后, 测定病毒滴度, 进行PCR鉴定。
流式细胞仪测定病毒感染效率, Western blot法检测重组腺病毒感染的人NB4细胞中RARα蛋白和凋
亡相关蛋白Bax 、Bcl-2的表达, CCK-8法检测重组腺病毒感染对NB4细胞增殖的影响, Annexin V/PI
双染法测定细胞周期, PI测定细胞凋亡。重组腺病毒穿梭质粒pAdTrace-TO4-RARα经双酶切及测
序证明构建正确, 病毒感染效率可达70%, 与空载体感染及未感染的NB4 细胞相比, 重组腺病毒感
染的NB4细胞内RARα蛋白的表达明显升高(P0.05), 且经生理浓度全反式维甲酸ATRA处理后, 能
够有效地促进感染重组腺病毒细胞的分化成熟和凋亡。该研究成功构建携带人RARα基因的重组
腺病毒表达质粒, 感染NB4细胞后可促进细胞增殖, 经生理浓度维甲酸诱导后能促进NB4细胞分化
成熟和凋亡, 为进一步研究该基因在急性髓细胞白血病发生发展中的作用奠定了基础。
关键词 RARα基因; 腺病毒; NB4细胞; 维甲酸; 增殖
Construction of Recombinant Adenovirus Vector Carrying Human RARα
Gene and Its Effect on NB4 Human Promyelocytic Leukemia Cells
1,2 2 2 2 2 2
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