牛胰蛋白酶制备工艺的改进及其对基因工程人胰岛素前体的酶切作用.pdfVIP

30 1 Vol. 30 No. 1 第 卷 第 期 沈 阳 药 科 大 学 学 报 2 0 1 3 1 Journal of Shenyang Pharmaceutical University Jan． 2013 p. 068 年 月 文章编号:1006-2858 (2013)01-0068-04 牛胰蛋白酶制备工艺的改进及其对基因工程 人胰岛素前体的酶切作用 1，2 1 ， 冷春生 李庆伟 (1. ， 116029 ;2. ， 134001) 辽宁师范大学生命科学学院 辽宁大连 通化东宝药业股份有限公司 吉林通化 : ， ， 摘要 目的对牛胰蛋白酶制备工艺进行改进 制备高纯度牛胰蛋白酶 并对其酶切基因工程人胰 。 ， 岛素前体的作用进行考察 方法 采用粗制后先色谱分离再活化的方法对传统工艺进行改进 对传 ; 统工艺制备样品和改进工艺制备样品中的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的比活力进行测定和比较 进 2 ， 。 一步采用这 种样品对基因工程人胰岛素前体进行酶切 对酶切作用进行比较 结果 传统工艺制 212. 5 U ·mg － 1 ， 20. 4 U ·mg － 1 ; 备样品中胰蛋白酶比活力为 胰凝乳蛋白酶比活力为 而改进工艺样 240. 4 U ·mg － 1 ， 0. 14 U ·mg － 1 。 品中胰蛋白酶比活力为 胰凝乳蛋白酶比活力为 传统工艺制备样品 16. 3% ， 酶切基因工程人胰岛素前体目标产物纯度质量分数为 改进工艺制备样品酶切基因工程人 32. 2% 。 SP 胰岛素前体目标产物纯度质量分数为 结论 粗制后先进行 色谱可实现胰蛋白酶原和 ， ， 胰凝乳蛋白酶原较好的分离 该方法适合于高纯度胰蛋白酶的制备 制备的胰蛋白酶适合作为工 具酶进行基因工程人胰岛素前体的酶切。 : ; ; 关键词 胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 基因工程人胰岛素 中图分类号:Q 78 ;R 284 ． 1 文献标志码:A (trypsin ，EC 3. 4. 21. 4 ) 、 ［2 － 4］。 胰蛋白酶 为蛋白酶的 谱 沉淀等方法纯化 但上述方法制得的产 ， 。 (chymotryp- 一种 在脊椎动物中作为