荧光分析法35305.pptVIP

基本概念 基本原理 1 分子结构与荧光 2 荧光强度的影响因素 3 荧光定量分析 荧光分光光度计 基本概念 荧光（ fluorescence ） 磷光（ phosphorescence ） 振动弛豫（vibrational relaxation） 内部能量转换（internal conversion） 体系间跨越 激发光谱 荧光光谱 荧光效率（fluorescence efficiency） 荧光量子产率（quantum yield） 荧光熄灭 共振荧光 与 迟滞荧光 荧光寿命 激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程 辐射能量传递过程 激发光谱与荧光(磷光)光谱 excitation spectrum and fluorescence （ phosphorescence ） spectrum 激发光谱与发射光谱的关系 荧光与分子结构的关系 2.化合物的结构与荧光 影响荧光强度的外部因素 4. 荧光熄灭剂的影响 如卤素离子，重金属离子，氧分子，硝基化合物，重氮化合物，羰基羧基化合物5 散射光的干扰 瑞利散射和拉曼散射 定量分析 定量依据：低浓度时，溶液荧光强度与荧光物质浓度成正比 F = KC 定量方法： 标准曲线法 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度 比例法 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较 仪器结构 练习 在测定分子荧光强度时，要在与入射光成直角的方向上进行测量，这是由于___（1998） A 荧光强度比透射光强度小 B 只有在入射光成直角的方向上才荧光 C 荧光是向各个方向发射的，为了避免透射光的影响 * * 荧光分析法 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量； 传递途径 辐射跃迁 荧光 延迟荧光 磷光 内转移 外转移 系间跨越 振动弛预 无辐射跃迁 激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大，发光强度相对大； 荧光：10-7～10 -9 s,第一激发单重态的最低振动能级→基态； 磷光：10-4～10s；第一激发三重态的最低振动能级→基态； S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 内转换 振动弛豫 振动弛豫 同一电子能级内以热能量交换形式由高振动能级至低相邻振动能级间的跃迁。发生振动弛豫的时间10 -12 s。 内转换 同多重度电子能级中,等能级间的无辐射能级交换。 通过内转换和振动弛豫，高激发单重态的电子跃回第一激发单重态的最低振动能级。 外转换 激发分子与溶剂或其他分子之间产生相互作用而转移能量的非辐射跃迁； 外转换使荧光或磷光减弱或“猝灭”。 体系间跨越 不同多重态,有重叠的转动能级间的非辐射跃迁。 改变电子自旋，禁阻跃迁，通过自旋—轨道耦合进行。 荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态（ 多为 S1→ S0跃迁），发射波长为 ? ‘2的荧光； 10-7～10 -9 s 。 由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长长； ? ‘2 ? 2 ? 1 ； 磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级→基态（ T1 → S0跃迁）； 电子由S0进入T1的可能过程：（ S0 → T1禁阻跃迁） S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1 发光速度很慢： 10-4～100 s 。 光照停止后，可持续一段时间。 1. 激发光谱 以激发波长为横坐标，荧光或磷光发光强度为纵坐标的光谱。激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大 2. 发射光谱 以荧光或磷光的发射波长为横坐标，发光强度为纵坐标的光谱 a.Stokes位移 激发光谱与发射光谱之间的波长差值。发射光谱的波长比激发光谱的长，振动弛豫消耗了能量。 b.发射光谱的形状与激发波长无关 电子跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长的能量，产生不同吸收带，但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光。 c. 镜像规则 通常荧光发射光谱与它的吸收光谱（与激发光谱形状一样）成镜像对