shRNANotch2对人脑胶质瘤细胞株U251生长及凋亡的影响.pdfVIP

310 　　肿瘤2011 年4 月第31 卷第4 期　Tumor Vol. 31, April, 2011 DOI:10.3781/j .issn.1000-7431.2011.04.006 Basic Research ·基础研究 shRNA Notch2对人脑胶质瘤细胞株U251生长及凋亡的影响 何　心，焦保华，郑克彬，田　伟，梁朝辉 河北医科大学第二附属医院神经外科, 石家庄　050000 [ 摘要 ]　目的：探讨稳定转染基因Notch2 短发夹状 RNA （short hairpin RNA, shRNA ）对胶质瘤细胞株 U251 生 长、增殖和凋亡的影响。方法：采用脂质体法将构建插入 Notch2-shRNA 和无意义 shRNA （Negative-shRNA ） 的重组表达质粒分别转染人脑胶质瘤 U251 细胞 , 建立稳定长效转染的细胞株；应用 RT-PCR 和蛋白质印迹法检 测 Notch2-shRNA 对 U251 细胞中 Notch2 表达的影响及相关蛋白表达的变化；MTT 法检测其细胞增殖的影响； FCM 法检测细胞凋亡率和细胞周期。结果：稳定转染 Notch2-shRNA 后，U2 15 细胞中 Notch2 mRNA 和蛋白的 P 表达明显受到抑制；干扰组细胞从第 5 天开始增殖明显降低 （ ＜ 0.05 ）；干扰组细胞的凋亡率为 （15.14 ±4.26 ）% ， P 明显高于 Negative-shRNA 组的 （2 .70 ±1.45 ）% 和未转染组的 （2 .10 ±1.72 ）% （ ＜ 0.05 ）；Notch2-shRNA 干 扰组细胞 S 期细胞所 占百分比为 （23.1 ±3.4 ）% ，明显低于转染 Negative-shRNA 组的 （41.2 ±6.9 ）% 和未转染 P 组 的 （53.2 ±7.8 ）% （ ＜ 0.01 ），而干扰组 G1 期细胞所 占百分率为 （51.8 ±3.9 ）% ，显著高于转染 Negative- P shRNA 组的 （38.9 ±9.7 ）% 和未转染组的 （25.2 ±7.7 ）% （ ＜ 0.05 ）；与转染 Negative-shRNA 组和未转染组相 比，干扰组细胞中p2 1 和 p27 蛋白表达量上调 , 而细胞周期蛋白cyclinD1 和微型染色体维持蛋白2 （minichromosome maintenance 2 protein, MCM2 ）的表达量下调。结论：Notch2 shRNA 能有效抑制 U251 细胞中 Notch2 的表达和 细胞的增殖，为脑胶质瘤基因治疗提供了新的靶点。 [ 关键词 ]　神经胶质瘤； RNA ，小干扰 ；基因，Notch2 ；U2 15 细胞 [中图分类号]　R730.624 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431(2011)04-0310-05 Effects of stable transfection with shRNA-Notch2 on the proliferation, cell cycle and apoptosis of U251 glioma cell line HE Xin, JIAO Bao-hua, ZHENG Ke-bin, TIAN Wei , LIANG Chao-hui Department of Neurosurgery , Second Affiliated Hospital , Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000,China [A BSTRACT]　Objective: This stu