应用实时荧光定量RT-PCR检测宫颈癌及其外周血中VEGF表达的研究.pdfVIP

应用实时荧光定量RT-PCR 检测宫颈癌及其外周血中 VEGF 表达的研究 刘素梅，赵淑萍 青岛大学医学院附属医院，青岛（266003 ） E-mail ：zhaoshuping2006@163.com 摘 要：目的 研究血管内皮生长因子在宫颈癌患者癌和癌旁组织及外周血循环细胞中的表 达情况，分析其在肿瘤生长与转移中的作用。方法 采用基于TaqMan 探针技术的实时荧光 定量 RT-PCR 法检测了 50 例宫颈癌患者癌及癌旁组织和 40 例正常宫颈组织标本中 VEGF mRNA 的表达情况及其对应的外周血中的VEGFmRNA 表达，分析其与临床病理参数之间 的关系。结果 宫颈癌组织及癌旁组织中VEGF mRNA 的表达水平无明显差异，但均与正 常宫颈组织的表达水平差异有显著性；宫颈癌组织中VEGF mRNA 的表达与肿瘤的组织学 类型无明显的相关性；而与肿瘤的临床病理分期、病理分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、 深肌层浸润间均呈显著的正相关。宫颈癌患者外周血中VEGF 的表达明显高于对照组水平， 与淋巴结是否转移密切相关，但与其他临床病理参数无关。结论 实时荧光定量 RT-PCR 可以敏感且特异性的检测出宫颈癌组织及外周血中VEGF mRNA 的表达，且方法准确可靠, 操作方便，在肿瘤的微转移的诊断监测方面有一定的应用价值。VEGF 有可能成为治疗恶性 肿瘤的一个潜在的分子靶点。 关键词：实时荧光定量RT-PCR；血管内皮生长因子；宫颈肿瘤 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ,VEGF)是迄今鉴定出来的最重要的 血管生成因子，具有促进血管内皮细胞分化、增生、迁移和浸润的作用。它与肿瘤的生长、 浸润和转移有密切关系，并与肿瘤生物行为相关 [1] 。子宫颈癌在妇科恶性肿瘤中居首位,其 浸润和转移是患者治疗失败死亡的主要原因。如何在早期发现其踪迹并控制其复发和转移是 最常见的棘手问题。关于 VEGF 在子宫颈癌组织中的表达和意义越来越受到国内外学者的 关注。本研究选择特异性较常规RT-PCR 更好的实时荧光定量RT-PCR(real time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术定量地对 VEGFmRNA 在宫颈癌患者组织和外周血中的表达 情况及意义进行研究，以探讨其临床应用价值。 1. 材料和方法 1.1 资料来源 所有标本均来自2004 年3 月-2005 年 12 月我院妇科手术治疗患者，包括50 例宫颈癌 患者及40 例子宫肌瘤行全子宫切除术患者。患者年龄31-72 岁，中位年龄52.2 岁。宫颈癌 患者按FIGO 标准分期，Ib 期15 例，IIa 期22 例，IIb 期13 例; 按WHO 组织学类型分型： 腺癌12 例，鳞癌34 例，腺鳞癌4 例；病理分化程度：高分化6 例，中分化22 例，低分化 22 例。术后证实无淋巴结转移20 例，淋巴结转移30 例。肿瘤直径＜4cm 28 例，肿瘤直径≥4cm 22 例。癌组织局限于浅肌层以内28 例，有深肌层浸润者22 例。所有病例术前均未经任何 治疗，临床资料完整。 1.2 标本采集 手术切除的宫颈癌标本离体后，立即于无菌状态下先取距肿瘤边缘 1-2cm 的癌旁组织, 然后沿肿瘤边缘切取生长活跃的瘤组织,将所取组织切成 3-5 mm 的组织小碎块装入冻存管 内并立即放入液氮中,随后将其转入-70℃冰箱内保存。同时采取该患者5ml 血贮存于肝素抗 -1- 凝管中。采用同样的方法取得并保存作为对照的正常宫颈组织及外周血。 1.3 主要试剂和仪器 德国Roche Diagnostics 公司的Lightcycler 荧光PCR 仪，RNA 提取试剂盒Trizol Reag