利用分子生物学技术鉴别真_假杂交稻的研究.pdfVIP

( ) 中国农业科学　1999, 32 2 : 112 Scientia A gricultura Sinica 利用分子生物学技术鉴别真、假 杂交稻的研究 1 1, 2 2 1 1 2 曾大力　钱　前 　何　平 　颜红岚 　孙宗修 　朱立煌 ( 1 中国水稻研究所, 杭州　310006; 2 中国科学院遗传研究所) 提要　对由湖北省某公证处封存的两份杂交稻材料进行DNA 、蛋白质指纹鉴定, 首先采用 业已建立的可特异鉴定以明恢63为父本的杂交稻真、假的 18引物进行 分析, 发现两份 P RA PD 材料的叶片及种子DNA 在0. 8kb 扩增带上存在着有和无的区别; 而所用的42个水稻微卫星标 记, 发现5个水稻微卫星标记具有多态性; 在此基础上, 进一步对两样品的种子水溶性蛋白质毛 细管电泳图谱进行比较, 二者在出峰时间及峰值上存在差异。上述结果表明, 两份材料并非同一 杂交组合, 但在遗传背景上存在较大的相似性。 关键词　杂交水稻; DNA ; 蛋白质; 指纹鉴定 〔1, 2, 3〕 杂交水稻因其播种面积大、产量高而在我国粮食生产中占有重要地位 。可近年来, 一些不法分子为追求经济利益频频购销假冒伪劣杂交稻种子, 严重影响了正常的农业生产, 〔3 〕 给国家和农民造成了重大的经济损失 。而目前所用的常规技术仅能从形态上进行鉴定, 植 株的形态因受环境影响较大, 除产生像绝产等现象能直接举证外, 对其它差异难以提供充分 的证据, 因此发展不易受环境影响的、能代表水稻指纹特征的鉴定技术十分重要。 RA PD (random am p lified po lym o rgh ic DNA ) 技术因其操作简便、多态性丰富、检测密度高、使用成 〔1, 2, 4, 5, 12, 14〕 本相对较低等优点而广泛应用于基因组DNA 序列之间多态性的检测 ; 微卫星 (m icro satellite) 标记, 又称为简单重复序列( sim p le repeat sequence, SR S 或 SSR ) , 是近年 来飞速发展起来的新型DNA 标记, 具有稳定、简便、多态性丰富、高度杂合性以及重组率低 〔9, 11, 13, 15, 16 〕 等优点, 而应用于遗传图谱构建、种质鉴定等研究领域 ; 而蛋白质指纹图谱则是生 物基因型在生化表现型上的一种反应, 利用不同品种在蛋白质组成成分上的差异来反应作 物遗传组成的不同, 其中的同工酶图谱则被国际种子检测协会( ISTA ) 推荐作为鉴别农作物 品种的重要依据之一, 该方法相对于形态学鉴定而言, 有着快速、简便、可靠以及费用低等优 〔6, 7, 10, 17 〕 点 。在本研究中, 我们对由湖北省某市公证处封存的两份杂交稻样本进行RA PD 技 术分析的基础上, 进一步采用水稻微卫星标记分析和水稻水溶性蛋白质毛细管电泳分析, 尝 试着利用重组的DNA 指纹和蛋白质指纹来精确鉴定送检材料的差异。 1　材料与方法 1. 1　材料