人APP基因C-末端片段在PC12细胞中的稳定表达及其对细胞生长和发育的影响TheStableExpressiono.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)21(5):9.131999 人APP基因C一末端片段在PC12细胞中的稳定表达 及其对细胞生长和发育的影响① 乌永中，马康涛，张乃祷 北（京医科大学生物化学与分子生物学系，北京 100083) 摘 要：APP在AD病因学中是一个重要的分子，但到目前为止尚缺乏良好的动物和细胞模型用来探 讨APP在AD发病中的作用。本研究旨在建立过表达人APP基因C一末端片段的遗传工程细胞系 将 人APP695cDNA中编码C一末端105个氨基酸的片段重组到真核表达载体PDORne。中形成重组质粒 pDORneo-CT，然后用脂质体将其转染到大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(P（C12)中。用800pg/mlG418筛 选获得了在mRNA和蛋白质水平均表达相应片段的稳定细胞系 细胞形态学观察和MTT,LDH分析 表明，该片段在细胞内的表达未能对NGF处理的PC12细胞产生明显的毒性作用。 关键词：反转录病毒表达载体；APP,,,：片段；PC12细胞；阿尔茨海默氏病 中图分类号：Q39 文献标识码：A 文章编号：0253-9772(1999)05-009-13 TheStableExpressionofHumanAPPGeneC-terminal FragmentinPC12CellLinesandItsInfluence ontheGrowthandDevelopmentofCells WUYong-zhong,MAKang-tao,M ANGNai-heng (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology,BeijingMedicalUniversity,Beijing100083,China) Abstract: Themajorobstaclestoclarifymolecularmechanismsinvolvedinamyloidmetabolismof Alzheimersdiseasehasbeentheunavailabilityofanimalandcellmodelsforthisuniquehumandisease. ThepresentresearchwasaimedatestablishinggeneticallyengineeringcelllinesthatoverexpresstheC-ter minalfragmentofhumanAPPgene.ClonedhumanAPPcDNAandretroviruseukaryocyticexpressing vectorpDoRneowereusedtoprepareforthetransformedPC12Celllines.RT-PCRandWesternBlot showedthatstabletransfectantswhichexpressthecorrespodingfragmentofAPPgeneinmRNAandpro- teinlevelhavebeenobtained.MorphologicalobservationandMTT,LDHassayshowedthatnoapparent toxiceffectshavebeenobserved. Kevwords:Retrovirusvector;APPc.10Sfragment;PC12cell;Alzheimersdisease 阿尔茨海默氏病(A（lzheimerDisease,AD）是继心脏病，癌症，中风之后引起人类死亡的重要疾病 ’〔〕。其神 经病理学特征是脑组织及脑血管上的老年斑沉积 2〔-3) 刀一淀粉样蛋白(/3-amyloidprotein,A#)A老年斑的主要 组分。A#来源于其前体APP(amyloidprecursorprotein)(0)。目前许多证据表明，APP基因的点突变、代谢异 常及过表达所引起的A刀的聚集，是AD发病的重要原因之一 ’一〔〕“。但到目前为止，尚缺乏良好的动物及细胞模 型用来阐明APP在AD发病中的作用。本研究旨在利用分子生物学及细胞生物学技术建立过量表达人APPC- ①收稿日期：1998-05--08