神经营养素-3基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达.pdfVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 $% ’!! ,% ’ 年 月 ##! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ()*+ ##! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 神经营养素 基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达 ! 张朝春 梁伟锋 杨希才 （中国科学院微生物研究所 北京 2###/# ） 摘 要：根据人神经营养素 （ ， ）的基因序列，把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母 14 C?679 9.?*%D*%E+914 E,-14 （ ）偏爱的形式，设计了 条 的寡聚核苷酸引物，通过 次连续 反应，获得了人工合成的 !#$% %’()*’ 2# 40 F 3@9D 3 GHI ,-14 J,( 片段（简称 +,1 4 - 基因）。将合成的+,1 4 - 基因克隆到)GKH@L 质粒上，获得重组表达载体)GKH@L1,-1 4M。将重组表达载体)GKH@L1,-14M 和)GKH@L1E,-14 分别电击转化宿主毕赤酵母NO223 菌株，经筛选得到重组转化 子。不同转化子经甲醇诱导，表达产物进行 检测、 检测和 分析，结果表明， 基因 OJO1G(N5 P.D.*9 M%D 5QKO( +,1 4 - 和$+,1 4 基因成功获得分泌性表达，从整体水平上，使用偏爱密码子的+,1 4 - 基因在毕赤酵母 NO223 菌株中的表 达明显优越于 基因（ ， ），表达量在诱导后 最高，达到 左右。 $+,1 4 ; R ! ’ 44! G S # ’#3 A F @0E 426:T Q 关键词：神经营养素 ，毕赤酵母，偏爱密码子，基因合成，分泌性表达 14 中图分类号： 文献标识码： 文章编号 （ ） UA/0 ( ###210#@ ##! #1#2#1#3 神经营养素 （ ， ）是神经营养 一抗 ，酶联二抗 14 ,.?*%D*%E+914 ,-14 (9D+1E?679 ,-14 )(M (9D+1HE+V.9 因子家族的主要成员之一，它是分子量约为 2!VJ， K:[ CIG 购自G*%67:7 公司；抗生素N!2/ 购自O+:67 ［］ 2 公司；其他试剂为国产或进口分析纯。 含 个二硫键，等电点大于 的碱性蛋白 。对交 4 @ 感神经元、感觉神经元、大脑皮层的上运动神经元、 # $ % 质粒、菌株和培养基 脊髓前角运动神经元以及大脑基底部的乙酰胆碱能 大肠杆菌Y\2#@、重组表达载体 )GKH@L1E,-14 ［］ 神经元 等都发挥重要的生物作用。因而 ,