一种简便有效的PCR扩增片段直接回收克隆方法.pdfVIP

( ) 2007 年 6 月 　 四川大学学报 自然科学版 　 J un . 2007 第 44 卷第 3 期 Journal of Sichuan U niver sity (N at ural Science Edition) Vol . 44 　No . 3 文章编号 : (2007) 一种简便有效的 PCR 扩增片段 直接回收克隆方法 康耀霞 ,张义正 ( 四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室 , 成都 6 10064) 摘 　要 : 作者提供一种简便快速的克隆方法 ,即直接对琼脂糖凝胶电泳分离的 PCR 产物进行 克隆 ,可获得较高的阳性克隆率. 结果显示 ,300～700 bp 大小的片段阳性克隆率为 70 . 72 % , 300 bp 以下和大于 700 bp 的片段阳性克隆率分别达到 6038 %和 45 . 33 %. 该方法适用于含 有大量不同大小 DNA 片段的 PCR 产物并需要同时对其进行回收和克隆的样品 ,不仅可以大 大简化实验过程 ,也可以降低假阳性出现的机会. 关键词 : PCR 产物 ;琼脂糖凝胶电泳 ;基因克隆 中图分类号 : Q78 　　　文献标识码 : A A simple and eff icient method f or cloning PCR products KA N G Yaox ia , ZHA N G Yiz heng ( Sichuan Key Laboratory of Molecular Biology Biotechnology ,College of Life Science , Sichuan University , Chengdu 6 10064 ,China) Abstract : A simple met hod was int roduced here for cloning a lot of PCR fragment s wit h T vector in one time . A high po sitive rate of recombinant plasmid was gained . The po sitive rate of cloning for DNA fragment s wit h 300～700 bp was 70 . 72 % , while t he rates for t ho se shorter t han 300 bp and longer t han 700 bp were 6038 % and 4533 % , respectively . Key words : PCR p roduct s , agaro se gel elect rop horesis , gene cloning 滤膜插片法[5 ] 、液氮反复冻融法及胶 回收试剂盒 1 　引　言 等 ,当 PCR 扩增片段的数 目较少时 ,这些方法具有 差异表达基因的筛选已经被广泛应用于基因 回收片段纯度高以及连接效率高等特点 ,然而对于 表达的研究 , Targeted Display ( TD) 作为一种广泛 需要同时回收并克隆多个 PCR 样品时 ,例如一对 使用的技术[ 1 ] , 与其它技术如 Differential Display 引物扩增