蛋白激酶C-δ在舌鳞癌中的表达特征及热诱导舌鳞癌细胞凋亡中的作用_百替生物.pdfVIP

蛋白激酶 C-δ在舌鳞癌中的表达特征及热诱导舌鳞癌细胞凋亡中 的作用 中文摘要 【目的】 研究蛋白激酶C- δ(protein kinase C- δ，PKC- δ)在舌鳞癌组织中的表达特 征及其在热诱导人舌鳞癌Tca8113 细胞凋亡过程中的作用。 【方法】 （1）应用EnVision免疫组织化学法检测42例舌鳞癌肿瘤上皮细胞中 PKC- δ蛋白的表达，以15例正常舌黏膜上皮为对照。每片随机观察5个高倍视野， 计算阳性细 胞数和上皮细胞总数之比，大于等于10%为PKC- δ阳性结果，小于10%为PKC- δ阴性结 果。（2 ）常规培养人舌鳞癌Tca8113细胞，应用PKC- δ活化抑制剂Rottlerin和DMSO预处 理细胞30min后，43 ℃水浴法加热处理各组靶细胞0min、40min 、80min、120min，常规培 养24h ，倒置显微镜观察细胞形态的变化；收获各组细胞，碘化丙啶（PI）染色，流式细 胞仪（FCM ）检测细胞凋亡率；Rhodamine123线粒体染色，收获各组细胞， FCM检测 Tca8113细胞线粒体膜电位 （△Ψm）的变化。常规培养4h ，收获细胞，提取细胞总蛋白， 免疫印迹分析Tca8113细胞中PKC- δ断裂活化状况；免疫细胞化学检测PKC- δ在细胞中的 表达定位变化。常规培养16h，收获细胞，提取细胞总蛋白，酶标仪比色法检测波长为405 nm 处的吸光度OD值（A405 ），以A405值代表Caspase-3的相对活性。 【结果】 （1） 15例对照组黏膜上皮细胞胞浆中可见PKC- δ阳性表达细胞，阳性细 胞率皆≥10%，PKC- δ为阳性表达；42例舌鳞癌肿瘤细胞中28例为PKC- δ阴性表达，14 例为PKC- δ阳性表达。经统计学分析正常舌黏膜组织中上皮细胞与舌鳞癌组织中肿瘤细 胞PKC- δ阳性表达率在统计学上有显著性差异(P0.01) ；舌鳞癌细胞中PKC- δ的表达与 病理分级无明显相关性(P0.05) 。（2 ）人舌鳞癌Tca8113细胞胞浆中及核周存在PKC- δ的表 达，加热可导致PKC- δ的裂解活化，形成功能性的催化片段，而Rottlerin抑制热诱导PKC- δ的裂解活化。加热后细胞免疫组织化学检测Tca8113细胞中PKC- δ从胞浆、核周转位到 细胞核内表达。靶细胞热处理0min、40min 、80min、120min后，随加热时间延长，Tca8113 细胞的凋亡率和Caspase-3 的活性逐渐增加，膜电位强度下降，Rhodamine123染色弱荧光 细胞即膜电位（△Ψm）下降的细胞百分比逐步增加。热处理0min、40min 、80min、120min， service@100 Rottlerin预处理各组Caspase-3 的相对活性（吸光度A405 值）分别为(0.08 ±0.01) 、(0.28 ± 0.03) 、(0.52 ±0.07) 、(0.79 ±0.04) (` x±s)， DMSO预处理各组的Caspase-3的相对活性（吸 光度A405值）分别为(0.09 ±0.02) 、(0.39 ±0.04) 、(0.64 ±0.02) 、(0.99 ±0.10) (` x±s)。热处 理0min、40min 、80min、120min，Rottlerin预处理各组的Rhodamine123染色弱荧光细胞百 分比(%)分别为(4.43 ±2.22) 、(15.87±0.55) 、(31.3 ±1.83) 、(42.56 ±2.67) (` x ± s)% ；DMSO 预处理各组的Rhodamine123 染色弱荧光细胞百分(%) 比分别为( 4.67 ±2.14) 、(23.43 ± 2.85) 、(39.9 ±3.97) 、(53.6 ±2.62) (` x ± s)% 。加热处理0min、40min 、80min、120min， Rottlerin 预处理各组的凋亡率( % ) 分别为 (4.76±0.88) 、(12.3±1.91) 、(31.5±2.61) 、 (36.53±0.65) (` x ± s)%，DMSO预处理各组的凋亡率(%)分别为(4.90±0.72) 、(22.1±1.35) 、 (43.2±1.57) 、(49.9±1.25) (` x ± s)% 。Rottlerin预处理组和DMSO预处理组Tca8113细胞在未 加