高血压病中β-AR基因多态性及基因型功能鉴定.pdf

中文摘要 前 言 高血压病是最常见的心血管疾病，然而目前对于高血压病的发病机制 尚不十分了解。高血压病是一种复杂的多基因疾病，是由多个基因的累加 作用和环境因素共同作用所引起的，这些基因的SNP及其特定组合可能是 造成疾病易感性最重要的原因，对疾病相关调节通路的候选基因进行SNP 的关联研究，可能是高血压病、糖尿病和癌症等多基因疾病研究取得突破的 希望所在。 13-AR在调节血压及心血管疾病发生中发挥着重要作用，是高血压病 的重要候选基因。我们应用PCR—RFLP方法对中国东北高血压病高发地 区相对独立人群中高血压病患者和正常人系统地检测了B—AR基因家族 3个亚型基因的四个cSNP的分布频率，进行病例一对照分析，探讨四个多 态位点在我国东北高血压病高发地区人群中的意义。同时构建§，一AR基 因真核细胞表达载体，通过细胞转染及AC活性检测初步研究两个cSNP不 同基因型对基因功能的影响。 实验材料与方法 实验材料 1．细胞培养相关试剂 2．COS7细胞系 3．基因克隆相关分子生物学试剂 4．细胞转染试剂盒 5．放免试剂盒 实验方法 型基因的四个cSNP的基因分型，高血压病组及正常对照组基因型频率应 用x2检验，进行病例一对照分析。同时检测各指标，应用t检验进行分析。 构建B。一AR基因真核细胞表达载体，利用脂质体法转染COS7细胞，以异 丙肾上腺索作为刺激因素，放免检测细胞内脚I—cAMP浓度，间接检测AC 活性。 结 果 B，一AR Ar9389Gly位点的基因型频率在高血压病组与正常对照组差 异有统计学意义，Gly49Ser位点的基因型频率在高血压病组与正常对照组 有显著差异；p：一ARAr916Gly位点和p3一ARTrp64Arg位点的基因型频率 在两组间没有显著差异。四个位点的基因型频率和等位基因频率与各指标 不同基因型组合的pcDNA3．1表达载体，通过细胞转染，结果发现在无激动 纯合子基因的细胞，而在有激动剂作用时，结果正相反；无论有元激动剂作 基因的细胞。 结 论 Ar916G1)r位点和p；一ARTrp64Arg位点基因型频率和等位基因频率与高血 压病不相关。四个位点的基因型频率和等位基因频率与各指标无相关性。 在有激动剂作用时，Ar醪89纯合子个体AC活性高。无论有无激动剂作用， Ser49纯合子个体AC活性均高。 关键词：B—AR基因；PCR—RFLP；SNP；AC ·2· Gene andfunctionalidentification Genotyping of[jrAR in Essential Hypertension Yu Postgraduate：Liang Adviser：Zhao Yanyan Major：Genetics A2BSTRACT Introducfion Essential the mostcommoncardiovascular h