染色体核型分析的显微分光光度法.pdfVIP

遗传 HEREDITAS 二 39- 41 1986 (Beijing) 8(6) 实 与 验 方 技 术 法 染色体核型分析的扫描显微分光光度法 张丰德 安祝平 岳慧琴 陈瑞阳 南〔开大学生物系，夭津） 核型分析是鉴别染色体进行配对分类的基 臂长度、着丝粒指数和染色体单位面积的积分 木技术。关于人类染色体的命名和形态描述已 光密度。 经开过六次国际会议，会议规定对无带染色体 三（）测定条件 的形态描述，主要参数是相对长度、臂比和着丝 100X油镜，扫描步距0.1um，扩展量程为 粒指数。核型分析的关键是准确地测定染色体 2，照明源450W氛灯，测定波长550nm,2号 的长度，精确地找出着丝粒的位置。现在通用 侧量光阑，有效测定面积0.61zmzo 的测量方法是对显微放大照片的手工量度， 比较精确的是采用投影法手工描绘[al。后者虽 结 果 与 讨 论 可得到误差0.1Jzm的数据，但准确地测定着丝 一（）染色体绝对长度与切断消光度的关 粒的位置，精确地测量短臂 P（)、长臂 q（）的 系 长度也有困难，特别是遇到弯曲的染色体标本 扫描完结作消光剖面图时，需根据染色体 就更加困难。我们试用扫描显微分光光度计， 末端空白处的透光度，正确地选定切断消光度 对人类染色体进行了初步测定，无论是平展的， 值 c（utoff)，如选择不当，就会影响测定的结 还是弯曲的染色体标本都可准确地测出Pq 果。cutoff值是由键盘输人计算机的，表1是 的长度，从而进行核型分析。 不同’cutoff值测定人细胞1号染色体的结果。 材 料 和 方 法 表 I 不同切断消光度测定染色体长度结果 切断消 染色体 ｛切断消 染色体 一（）材料 光度 (A) 长度 lam ｛光度(A) 长度 hum 人外周血细胞中期染色体，用低渗法制片， 0.05 9.7 8．8 吉姆萨染色幻〔，选用3个分散良好的细胞。 0。10 9。3 8．6 0.15 9.1 8。4 二（）仪器 一）一： 0.20 8．9 ！ t，·“，‘ 5．3 Reicher：产Univa：扫描显微分光光度计， 配有透镜扫描 L（ensScanner）附件，最小等效 由表统计，消光度切断值每增加0.1，染色 扫描步距为0.05tzm[s7，以 Comodore8032-SK 体长度缩短0.41,umo 微型计算机控制，带有染色体扫描程序。这种 二（）着丝粒中心的精确定位 程序是依据 Beer-Lambert定律而设计的剖面 在中期染色体两条单体未分开以前，特别 图程序，扫描点沿染色体中心轴从短臂末端向 是中着丝粒、近中着丝粒染色体，长短两臂的宽 长臂方向扫描，并同时贮存各点的光度值，然后 度要大于着丝粒。用Giemsa溶液染色后，两臂 在显示终端上画出消光剖面图。横座标为染色 体的长度，纵坐标为每点的消光值421，继而由专 ZhangFengdeetal.:ScanningMicrospectrophoto-