重组人SOD2／3杂合酶的制备及其生物活性初探.pdfVIP

V0l_37NO．6 华 东 理 工 大 学 学 报 (自然 科 学 版) 2O1l12 JournalofEastChinaUnix，ersityofScienceandTechnology (NaturalScienceEdition) 715 文章编号：1006—3080(2011)06—0715—07 重组人 SoD2／3杂合酶的制备及其生物活性初探 程安 阳， 范立强， 赵 健 ， 李小灵 ， 王 刚 (华东理工大学生物反应器3-程 国家重点实验 室，上海 200237) 摘要：为获得重组 SOD2／3杂合酶 ，以及观察 SOD2／3能否转导入 宫颈癌细胞 ，抑制肿瘤细胞 的增殖，构建了原核表达载体 pET—s(_)D2／3，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达获得 N端 带有 6个组氨酸标签的sOD2／3杂合酶；用Ni柱金属螯合亲和层析纯化重组 SOD2／3；利用肝素 柱层析验证 SOD2／3的肝素靶向性；将纯化后的融合蛋 白加入体外培养的宫颈癌细胞 ，通过 FITC 和 MTT 实验观察杂合酶 SOD2／3的转导能力及其在细胞 内的活性。成功构建 了S0D2／3杂舍酶 的表达载体 ，重组 s()D2／3表达量 占菌体总蛋 白30 左右 ；金属螯合亲和层析一步纯化，回收率在 7O 以上，纯度达 9O 左右；重组酶能与肝素亲和层析结合 ，说 明杂合酶 SOD2／3有肝素靶向性 ； 细胞实验证实SOD2／3较SOD2能更好地抑制 Hela细胞生长。获得 了较纯的重组 SOD2／3杂合 酶 ，该酶能直接 以天然有活性的形式转导人 宫颈癌细胞 内并抑制其细胞增殖，具有很好的作为肿瘤 治疗 、抗氧化损伤药物 的潜力 。 关键词 ：S()D2／3杂合酶；表达 ；纯化 ；抗肿瘤 中图分类号：Q812 文献标志码 ：A PreparationofRecombinantHybridHumanSOD2／3and ItsBio-logicalActivityAssay CHENGAn—yang， FAN Li—qi．ang， ZHAOJian， LIXiao—ling， WANGGang (StateKeyLaboratoryofBioreactorEngineering，EastChinaUniversityofScienceand TechnologY，Shanghai200237，China) Abstract：Toobtainrecombinanthybridhuman superoxidedismutase (rhS()D2／3)and investigate whetherSOD2／3 fusion protein could betransducedinto and inhibitthegrowth ofhuman cervical carcinomacelI，therecombinantplasmidpET—SOD2／3wasconstructedandtransformedintoE．COliBI21 (DE3)toexpressrhS()D2／3．rhSOD2／3waspurifiedbyNi—NTA affinitychromatographywiththe propertyofitsN—terminal(His)6affinitY tag．Heparin affinitychromatographywasused to testthe heparin—bindingabilityofrhSOD2／3．ThepurifiedS()D2andSOD2／3wereincubatedwithHelace11s． FITCandMTT assaywasusedtotesttheiranti—tumorgrowthactivities．ThehybridSOD2／3Was successfullyexpressedin E．coli，accounted forabout30 ofthetotalbacterialprotein andh