转萝卜过氧化物酶基因Rsprx1提高毕赤酵母抗盐性.pdfVIP

ISSN 1007-7626 中国生物化学与分子生物学报 http：／／cjbmb．bjmu．edu．cn 2011年 12月 CN 11-3870／Q ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology 27(12)：1149～1155 转萝 卜过氧化物酶基因Rsprxl提高毕赤酵母抗盐性 何静辉，杨 静，王 丽，李 日辉，穆 春，贾晓琳，王林嵩 (河南师范大学生命科学学院，河南 新乡 453007) 摘要 为探讨转萝 卜过氧化物酶基 因(Rsprx1)提高毕赤酵母 (Pichiapastoris)抗盐性机理，用不 同 浓度 NaC1处理转基 因酵母 GSRP25和野生型酵母 GS115，检测菌体生长、相对无机盐含量、过氧化 物酶活性和 同工酶谱及某些抗性基因表达．实验结果表明，在 YPD培养条件下，转基因酵母的过氧 化物酶活性和菌体生长速率高于野生型酵母 ，其过氧化氢酶 (CTT1)、热休 克蛋 白(Hspl2)、Rsprxl 基 因表达和 K ／Na 比值均高于野生型．醛脱氢酶 (ALD3)的mRNA表达在两者之 间没有差异．在 BMMY培养条件下，转基 因酵母菌体生长速率和过氧化物酶活性显著高于野生型酵母．因此 ，转基 因酵母通过增加过氧化物酶基 因表达提高过氧化物酶活性 ，改变细胞的某些基 因表达和无机盐相 对含量，从而提 高酵母抗盐能力． 关键词 过氧化物酶；基 因表达 ；盐胁迫 ；毕赤酵母 中图分类号 Q554+．6 EnhancementofSaltToleranceinPichiapastoris byGeneTransferofRadishPeroxidase HE Jing．Hui，YANG Jing，WANG Li，LIRi—Hui，MU Chun，JIA Xiao—Lin，WANG Lin—Song (Schoolof￡ifeSciences，HenanNormalUniversity，Xinxiang453007，Henan，China) Abstract In orderto investigatethe effectsofperoxidaseon the tolerance ofyeastagainsthigh-salt stress，twostrainsofPichiapastoris，including itstransgenicand wild type，weretreated bydifferent concentrationsofNaClin YPD orBMMY medium．Theresultsshowedthattheperoxidaseactivity and growthrateintransgenicstrainwerehigherthanthoseinwildyeaststrainwithYPD medium ．Thegene expressionofcatalasel。heatshockproteinl2，radishperoxidaselandtheK ／Na ratiowereincreased intransgenicyeaststraincomparedwithwildyeaststrain．Therewasnoexpressiondifferenceinalcohol dehydrogenasemRNA between the two strains．The growth rate oftransgenic strains and peroxidase activityweremuch higherthan thatofwild strain in BMMY medium．Therefore．theperoxidasegene (Rsprx1)ofChineseredradishimprovesresistancetosalinityinyeastsbyincreasingtheexpressionof peroxidasegeneto increasetheperoxidaseactivity，to