高效液相色谱一同位素稀释一电感藕合等离子体质谱法 研究大鼠体内.pdfVIP

第35卷 分析化学 (FENXIHUAXUE)研究报告 第6期 2007年6月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 803-808 高效液相色谱一同位素稀释一电感藕合等离子体质谱法 研究大鼠体内的汞结合蛋白 史俊稳1,2丰伟悦” 王萌，,2张芳2李柏， 汪冰，,2朱墨桃,2‘柴之芳 ‘ ，(中国科学院高能物理研究所，核分析技术重点实验室，北京100049) 2(中国科学院研究生院，北京100049) 摘 要 利用高效液相色谱(HPLC)和电感藕合等离子体质谱(ICP-MS)联用技术，对经胚胎早期甲基汞暴露的 母、仔鼠脑胞液和肝胞液中汞结合蛋白进行了研究。采用柱后(Post-Column)同位素稀释法(ID)技术定量计算 了母、仔鼠组织胞液中与蛋白结合的汞。HPLC-ID-ICP-MS方法的汞回收率与直接ICP-IDMS法的实验结果一 致。该方法可以克服生物样品微量元素化合物分析中灵敏度低和标准蛋白不足的缺点，有利于生物体内低丰度 金属结合蛋白的分离分析和定量研究。 关键词 高效液相色谱，同位素稀释，电感祸合等离子体质谱，汞结合蛋白 1 引 言 汞的生物毒性主要源于其与生物体内蛋白质或多肤中琉基的高度结合，从而抑制生物体内重要生物 酶的活性，进而引发一系列的机体损伤’1〔。因此，汞暴露后生物体内汞结合蛋白的研究，对进一步探讨汞 的毒性机理以及汞的生物毒性评价具有重要的意义。目前对生物体内汞结合蛋白的研究主要集中在金属 硫蛋白(MTs)上[[2,3]，对生物体内其它的汞结合蛋白的研究还很少。 生物样品的低挥发性和热不稳定性决定了其微量元素化学形态的研究不宜采用高分辨率的气相色谱 (GC)法。与GC相比，液相色谱(LC)则更适宜于生物样品的分离和分析。从LC柱流出的洗脱液可以很 方便地采用传统的元素分析方法，如原子吸收、原子荧光等实现在线检测[[4]。然而，由于生物体内具有特 定生物学信息的微量元素化合物往往含量很低，传统的检测器远不能满足实际样品所要求的灵敏度[’〕。 1980年，Suzuki[6]最早采用电感藕合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)来解决生物样品中微量元素化合物 的检测问题。随后，电感藕合等离子体质谱(ICP-MS)的问世，很好地满足了生物样品中微量元素化合物分 析的高灵敏度的技术要求[7,吕〕。 高效液相色谱一电感藕合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用技术对生物样品中金属结合蛋白的分析， 提供了很好的技术支持。但对X些结构未知或蛋白标准不易获得的金属蛋白的定量研究，还存在一定的 困难。这也是目前金属蛋白质组学研究领域函待解决的问题之一。同位素稀释分析(IDA)是一种可靠 的、高精密度的元素定量分析方法，在有关汞的研究中，同位素稀释法已被广泛应用于环境迁移、食物链富 集和汞形态转化等方面的研究中[[9,10]。上世纪九十年代，IDA开始被应用到HPLC-ICP-MS在线分析 上[11]。现已利用柱后同位素稀释技术对人血清、酵母等生物样品中微量元素Fe,Cu,Zn,Se结合蛋白组分 进行了定量研究，得到了满意的结果[12-14]。然而，有关生物样品中汞结合蛋白定量分析研究还未见报道。 胚胎早期低剂量汞暴露对子代的毒性影响是目前汞毒理学研究的热点。本研究采用HPLC-ICP-MS 联用技术对经胚胎早期低剂量甲基汞暴露的母、仔鼠脑胞液和肝胞液中含汞蛋白进行了分离分析，采用柱 后IDA技术定量计算了组织胞液中与蛋白结合的汞，并与直接IDA法的实验结果作了比较。该法可以为 今后汞结合蛋白的研究，以及生物体内微量元素化学形态的分析提供准确的定性、定量分析方法，并为汞 2006-07-31收稿;2007-01-20接受 本文系国家自然科学基金(No20475055)及中国科学院重要方向性项目资助 *E-mail;fengwyCmail.ihep.ac.cn 分析化 学 第35卷 的毒性机制研究提供新的研究手段。 2