Annexin+A2在非小细胞肺癌中选择性表达并促进肺癌细胞侵袭和转移.pdfVIP

·中文论著摘要· Annexin A2在非小细胞肺癌中选择性表达并促进肺癌 细胞的侵袭和转移 -址!- 刖 菁 膜连蛋白家族成员与不同种类肿瘤的发生发展关系密切，并且参与肿瘤细胞 生长和分化等调节机制。膜连蛋白A2(AnncxinA2)是膜连蛋白家族中的一员， 是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，有一个短的决定其生物学特性的疏水N．端结构域 和一个参与磷脂结合的核心区。AnnexinA2参与了多种生物学活动，包括信号转 A2 导、细胞迁移、DNA合成、细胞增殖和凋亡等。近来多项研究表明，Annexin 在多种肿瘤中表达失调，且其表达水平和肿瘤的发生、浸润、转移、临床分期和 A2对侵袭和转移的影响研究 愈后密切相关。目前在非小细胞肺癌中关于Annexin 有限。本研究旨在探讨AnnexinA2在非小细胞肺癌中的表达情况及其对体外培养 肺癌细胞侵袭和转移的影响。 材料与方法 1、材料与试剂 120例原发性肺鳞癌、腺癌石蜡包埋标本，来自2000年-2005年中国医科大 学附属第一医院手术切除的原发性肺癌组织。人正常支气管上皮细胞HBE，人肺 巨细胞癌细胞系BEl(高侵袭能力亚型)、LH7(低侵袭能力亚型)；肺腺癌细 Cruz公司，S-P超敏试剂 鼠抗人AnnexinA2单克隆抗体(sc-28385)购自Santa (sc．1616)购自中山生物技术有限公司，辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗 (ZB．2305)、羊抗兔二抗(ZB．2301)购于北京中杉 1 A2 金桥生物技术有限公司。AnnexinsiRNA(sc．29199)购自SantaCruz公司， 2000 转染试剂lipofectaminereagent购自Invitrogen公司。 2、实验方法 (1)细胞培养 (2)免疫组织化学(S．P)法 标本经中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4am厚连续切片，采用链霉素抗 生物素蛋白．过氧化物酶法(S．P)，进行免疫组化染色。DAB显色。用PBS代替 一抗作为阴性对照。 (3)肺癌细胞系的免疫化学染色(S．P)法 细胞爬片后加入固定液固定，采用链霉素抗生物素蛋白．过氧化物酶法(S．P)， 进行免疫组化染色。DAB显色，棕褐色反应产物代表抗原定位。用PBS代替一 抗作为阴性对照。 (4)Westernblot 提取细胞蛋白，采用卡玛斯亮蓝法进行蛋白定量。取等量蛋白，进行 SDS．PAGE凝胶电泳、转印，一抗(anti-AnnexinA21：300稀释，anti．B．actinl：500 稀释)，辣根过氧化物酶标记二抗(1：1500稀释)室温孵育，ECL发光，结果经 5500，AlphaInnotech，USA)成像， 自动电泳凝胶成像分析仪(Chemilmager FluorChen V2．0系统采集数据。以8-actin为内对照。实验重复3次，取算术平均 值进行统计分析。 (5)SiRNA转染 AnnexinA2 传代细胞LTE在培养瓶中生长2天后，传至六孔板，跏l SiRNA与 A2SiRNA与 鲰lLip2000分别与100pl无双抗无血清培养基混合后将Annexin Lip2000溶液混合，再以1：5的比例与无双抗无血清培养基混合，用无双抗无血清 培养基将