β-果糖基转移酶和β-呋喃果糖苷酶分离纯化及其在FOS生产中应用.pdf

广西大学硕士论立 果糖基转移酶和呋喃果糖苷酶的分离自u化歧基在FQ曼生兰±塑查旦 中的应用 摘要 低聚果糖(FOS)因其具有高效增殖双歧杆菌、排毒洁肠、低卡值防龋齿 和改善脂质代谢(降血脂及胆固醇)等优异性能，逐渐受到消费者的青睐。 FOS和水解蔗糖、FOS的作用。作者以米曲霉GXl 对象，做了如下工作： 1．在500ml摇瓶，200mI装液量条件下，综合考虑了不同种类和浓 度的碳源、氮源、微量元素以及温度、pH值、摇床转速等对产酶的影响， 通过正交设计与单因素实验结合的方法，得出产FTS优良菌株米曲霉 种量3％，培养温度29℃，培养时间32h，摇床转速1 平均最大产酶为16．928U／mj培养基，是优化前的5倍。 2．依次通过热变性、硫酸铵分级沉淀以及DEAE-SephadexA-50(1)、 CI一4B、Sephacryl OcWl—Sepharose S-300、DEAE—Sephadex 983 121．7倍，1975U／mg和17％，FFS则相应为396．4倍，U／mg和7％。 kDa，FFS 从SDS—PAGE电泳检测结果计算得到FTS的亚基表观分子量为51 的亚基表观分子量为31kDa。不扩散的清晰条带以及较小的分子量，说明 果糖基转移酶和呋喃果糖苷酶的分离纯化及jC在FO．S生产中的应用 该FTS只是普通的蛋白质酶类，不是糖蛋白。酶活测定表明转果糖基作用 和水解糖苷键作用分属FTS、FFS两个酶完成。 pH4 V。分别为240．5309／L、2．2179／L／mi 73．472 常0寄4，K；1 g／L。FFS的V…j}口K。分另0为0．2585g／L／m；n幂口 105-／1 外，作者还研究了常见碱金属，碱土金属，过渡金属离子以及络合剂， 变性剂对FTS和FFS的影响，未发现明显的激活剂。 4．根据FTS活性基团化学修饰的结果，在有无底物保护条件下， 该酶活力的抑制在有无底物保护情况下结果相同。因此，推测FTS活 性中心可能包括丝氨酸残基，色氨酸残基，天冬氨酸(谷氨酸)残基，而赖 氨酸残基对酶活有一定影晌，可能与维系酶活性中心构象有关。它们 mmo J／L、5．50rilmoI／L、25．86 8．59 的fC5。分另0为27．08 mmof／L幂口1 rffrrloI／L。 活力条件下，抑制FFS活力效果显著。研究发现，在特定频率下，分 广西大学硕上论文 果糖基转移酶利呋哺果糖苷酶的分离纯化及其在FO$生产中的应用 n或(A+700)w、5mi 别用(A+300)W、20mi n超声波处理粗酶液时，均使 ％蔗糖底物时，FOS最大含量分别达55．72％和62．15％，结果和纯FTS 的相当，却比破碎后粗酶反应平均结果47．3％、53．5％高很多。 关键词：低聚果糖米曲霉B一果糖基转移酶 13-呋喃果糖苷酶分离纯 化酶学性质 广西大学硕士论文 果糖基转移酶和呋哺果糖苷酶的分高纯化及其在FOS生产中的应用 PURIFICATION AND US FROMASPERGILL [j-FRUCTOFURANS