gD基因在生殖器疱疹PCR诊断中的研究.pdfVIP

维普资讯 2—2jI gD基因在生殖器疱疹PCR诊断中的研究 2．t10牛 杨慧 I 李 明 V△廖元兴 昊锦银 江悦华 杨太成 摘要 律据国外已发表的疱疹病毒 StudyongD geneinthediagnosisofgenitalherpesbypoly- (ttS~)糖睦白D基因(gD基因)的核苷 moFa$chainreaction 酸保守区博乱设计了一对；l物，建立了 YangI-Iuila~，uMing，Liao nx Wu脚 ， gYuehua，Yang 用疱疹州毒gel基因做疱疹病毒诊断基 Tai~engfC．ua~g,zhouGeneral麒 f D，GMr嘞 ∞ MilitaryCommand, 因的Pc 方法。对48倒拟诊为疱疹病 J0DJDl 毒感染坩樯床标皋进行病毒细胞培齐 tract P。ly卫口哪神 chainre~tion (PeR)唧p0【yiIgspecificprimersc0n叩0r_djnEto 和PeR祷测。蛄果表明，PeR时ttSV-2 c0瑚晰 ed~equeneeofgD eneofttSV一25h w舳 appliedto48elinle~lspeelme~ ofp 感染的戢l靠性为84％(20／24)，特异性 tients lhgenitalI．erpe~0rn 鲁e讪 ohBdah I。ryofg 叫 hep髑，Ourr鹤u sh~ edth 为91％(缸 ／24)。经标准袜度限制性内 the ∞hjvityaI1dsic~eifieity0fPeRforlt~V-2infeeti~mwere84％(20／24)a丑d91％(22／ 切酶的酶 证实和序列分析 ，表明该方 24)l印ecvel The~ lifiedpn：~luets0rltSV-28Ⅲr· 6tl~nidentifiedby~equenee 法特异、牛意。 ^ amIysi8aIId 啦idj∞ end0nu山ase蚰出 8showedthattheseniticityandspeeifiei~0fPCR 关羹词 l±苎盘毒癌孟 墨生兰蓬 w啪 very g ll生 苎 l墨璺 xey训H由 He simplexvires PeR gDgene 疱疹病毒 (HSV)分为HSV．1 菌棉签擦取皮损部位液体及组 TGCTCC，GDP2：CGGGTCGACGTC． 和HSV．两个血清型 HSV．1主要 织。标本采集后立即浸人 0．5ml病 CTGGATCGACGGGATG 在 GDP1 引起腰部以上半身感染，如 口唇、 毒移送液 (RPMI1640液 ，含 5％小 的5’端接上 ECOR[的酶切位点， 面部、 龈疱疹。HSV．2主要引起 牛 血 清 ，300u／ml青 霉 素 和 引物经 EMBL电子机算机基 因库 生殖器雷的炎症和疱疹 全世界总 300~g／m]链霉素)内，一70℃冰箱 检索同HBv、EBV、CMV无同源系 人u中约70％的人血清HSV抗体 保存备 用。应 用时离心 5000r／ 列 ，I物 由上海复旦大学遗传所基 阳性 II』以往用PCR诊断生殖器 min，l5分钟。上清用于细胞培养 ， 因合成室合成 疱疹多逵择DNA聚台酶区．最近 沉淀用于PCR反应， 1．4 PCR检测 HSV．DNA病毒感 研究表明gD基因是诊断研究的靶 1．2 病毒和细胞 HS~．2Say国际 染的~ero细胞或含病变脱落细胞 基因 0。J本研究用疱疹病毒 基 标准毒株及 Vem细胞株均引 自中 的培养上清 500~]，离心 15000r／ 因