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* * 蛋白质含量的测定 —Folin-酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝法（Brodford法） 一 Folin-酚试剂法（Lowry法） 目的和要求 学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 进一步掌握分光光度法——求标准曲线、准确测定未知样品、正 确使用仪器 原理 蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如折射率、比重、紫 外吸收等测定而得知：或用化学方法，如定氮、双缩脲反应、 Folin-酚试剂反应等方法来求算。其中双缩脲法和Folin-酚法 是一般实验室中经常使用的方法。它们操纵简便、迅速，不需 要复杂而昂贵的设备，又能适合一般实验室的要求，若作一般 的浓度测定较为适应。Folin-酚法灵敏度高，较双缩脲法灵敏 100倍。本实验采用的是Folin-酚法。 Folin-酚法所用的试剂由两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试 剂，可与蛋白质中的肽键起显色反应。试剂乙（磷钨酸和磷钼 酸混合液）在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈 蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。由于蛋白质中含有带酚基 的酪氨酸，故有此颜色反应。因此，用Folin-酚法测定蛋白质 含量灵敏度较高。 实验步骤 标准曲线的制作：按下表操作 各试管加入试剂甲5.0mL，混合后放置10分钟，加入试剂乙0.5mL，立即混合，37度恒温反应20分钟。以1号为参比，测A750的值。 0 50 100 150 200 250 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1 2 3 4 5 6 步 骤 Pr.含量 μg H2O BSA （300μg／mL） 管 号 2. 样品（小白菜）液的提取 称取小白菜1-4克（菜杆2-4克，菜叶1-2克）置于研钵中，加5mL蒸馏水在低温下研磨成匀浆，全部转移至50mL容量瓶中，并定容至刻度，然后抽滤，在3000rpm离心20分钟，上层清液为提取液，待用。
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