基于在线固相萃取甲氨喋呤血药浓度高效液相色谱测定方法的不确定度评估.docVIP

提交时间： 年 月 日 永州职业技术学院毕业论文（设计） 诚 信 声 明 本人郑重声明：所呈交的大专毕业论文（设计）“基于在线固相萃取甲氨喋呤血药浓度高效液相色谱测定方法的不确定度评估”是本人在指导老师的指导下，独立进行研究所取得的成果。成果不存在知识产权争议，本毕业论文（设计）不含任何其他个人或集体已经发表过的作品成果。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 毕业论文（设计）作者签名：李娟 20 14 年 5 月 11日 目 录 摘要4 一 5 二 材料与方法7 2.1 试药与试剂2.2 仪器设备2.3 色谱条件 2.4 样品处理 2.5 结果的计算公式 三 不确定度的评估 3.1 识别不确定度的来源 准确性的不确定度的评估 比例回收率的不确定度的评估 3.2.2 固有偏差不确定度的评估 3.3 精密度的不确定度评估 3.4其它不确定度的评估 四 实验结果 五 讨论 参考文献 2011级三年制药学1班 李娟 指导老师 王秋霞 基于在线固相萃取甲氨喋呤血药浓度高效液相色谱测定方法的不确定度评估 摘 要  一、前言 最新的方法学国际词汇和基本术语中描述不确定度：“表征合理地赋予被测量值的分散性、与测量结果相系的参数 ”[1]，不确定度是定量测量质量的一个参数，因此，一个结果的表示如果没有不确定度就不可信。近来分析家都被要求他们的分析结果要有可靠性而且要有可比性，因此在分析化学领域评估不确定度成为了一大焦点[2]。由于分析结果的不确定度是应用于各种目的的重要信息，重大的决定经常都依靠这些结果，所以溯源性和结果的可靠性（不确定度）作为定义这些结果质量的参数，必须要评定。溯源和不确定度是两个相关的概念，要理解它们之间的联系，首先就要解释不确定度的概念。如果一个分析结果表示成1±U，这里的不确定度表示成置信区间，所有的分析者都应该证实 1 的偏差是可以溯源的，用一种国际上公认的物质来保证包括真值的置信区间的真实性。只有分析方法的溯源性被证实了，不确定度才能够用这个化学程序且用相似的测试液代替日常用品评估其溯源性。 不确定度的大小反映了一个实验室的水平，不确定度越小，实验室的水平越高。不确定度已在各领域得到了广泛应用。随着药物研究、生产各环节标准的制定和建立, 以及实验室认可、 认证制度的逐步推广, 不确定度也逐渐在药物领域中得到应用。尤其在临床检验中，所赋的值, 其准确性、可靠性以及分散性都会直接影响到疾病的诊断、治疗方案的确定以及疗效的观察，因此, 国际标准化组织15189《医学实验室质量和能力的专用要求》 中明确要求:“必要且可能时, 实验室应确定检验结果的不确定度”[4]。尤其在临床检验中，测定结果是用药的依据，但到目前为止还没有明确指南，美国临床和实验室标准协会与ISO合作，正在起草临床实验室测量不确定度评定与表示的指南文件[7,13]。 甲氨喋呤为二氢叶酸还原酶抑制剂，大剂量 MTX/亚叶酸钙解救疗法广泛用于治疗白血病、淋巴瘤、绒毛膜上皮癌、骨肉瘤等恶性肿瘤[12]，但MTX具有较大的骨髓抑制、黏膜炎、胃肠道上皮脱落、肾小管阻塞和损伤、肺炎和神经毒性(鞘内给药) 等毒性[13]，且这些毒性与血药浓度关系密切，因此MTX血药浓度监测是大剂量MTX/亚叶酸钙解救疗法的重要环节，为临床上何时停止亚叶酸钙解救提供了必要的浓度参考。 本实验室建立基于在线固相萃取系统的甲氨喋呤血药浓度的测定方法，于文献报道的方法比较[14-16]，简化了操作步骤使得减少了不确定分量的来源，使方法易于质量控制减小了不确定度分量的大小，从而使本方法准确、简单、不确定度来源少、易于质量控制，适于常规血药浓度的监测。在本文中即对该新型方法进行不确定度评估，来评价我们这套方法的优劣，是否满足实用性的要求，且为测定的结果提高科学、公正、同时可溯源的数据。本报道中测量不确定度采用的方法为在上文中提到的由欧盟和BarwickEllison提出的 “Validation-based”方法，对本测量方法的精密度、准确度等引起的不确定度进行评定。 2.1 试药与试剂 MTX对照品（含量纯度95.00%±0.06%，0138-9702）由中国药品生物制品检定所提供；流动相由乙腈（Georgetown.Ont,Canada L7G.4R9，HPLC grade，FAX(905)877-6666）、甲酸(长沙福滋堂生物技术开发有限公司，AR)、醋酸铵（长沙安泰精细化工实业有限公司，AR配置；生物沉淀剂为高氯酸（天津市鑫源化工厂；PBS溶液由磷酸氢二钠（国药集团化学仪器有限公司，与磷酸二氢钾（国药集团化学仪器有限公司，F20070