DS9701菌株诱变及其酶学性质研究.pdf

一、摘要 (聚3·羟基丁酸(PHB)不仅具有热塑性塑料的性质，还在自然环 境中具有生物可降解性，因而成为传统石化塑料的替代品，在工业等 领域具有广阔的应用前景，也成为国内外生物材料领域的研究热点。太 自然界中的许多种微生物都具有降解PHB的能力，这依赖于分泌 一种特殊的胞外PHB解聚酶。本项工作主要是筛选能高效降解PHB 的突变株，并对其进行酶学性质的研究，主要结果如下： 生孢子，采用透明圈初筛和摇瓶培养复筛的方法，获得4个能稳定遗 传的PI-IB解聚酶高产菌株。其中09菌株的酶活是原始菌株的2．3倍。 2．初步研究了02、04、09和14菌株粗酶液的基本性质。02菌 株粗酶液的最适反应温度45℃～50。C，温度稳定范围40℃～50。C；最适 反应pH5．o，pH稳定范围4．∞5．0。(04菌株粗酶液的最适反应温度 50℃，温度稳定范围40℃～50℃；最适反应pH5．0，pH稳定范围5．0～7．0。 09菌株粗酶液的最适反应温度50℃～60℃，温度稳定范围40℃～50℃： 最适反应pH5．0，pH稳定范围5．∞7．0。14菌株粗酶液的最适反应温 度40℃，40℃以下稳定；最适反应pH5．8，pH稳定范围5．∞8．0。J- 3．经过比较粗酶液的性质后，对09号菌株产生的PHB解聚酶进 行了分离纯化，并对其解聚酶的特性进行了探讨。『以粗酶液为起始，经 G．100凝胶过滤后，分离纯化了该酶，纯 硫酸铵分级沉淀、Sephadex 化倍数约为37．9，酶活力回收率8．9％。经12．5％SDS—PAGE法测得所 分离纯化酶蛋白的相对分子质量约为41．5KD。该酶反应的最适温度和 5．0～6．0范围内稳定。一 pH分别为50℃和5．0。在温度50℃以下和pH 些金属离子对PHB解聚酶有抑制作用。质谱仪测得酶降解PHB的产 物主要是二聚体。1 7 关键词：聚3一羟基丁酸(PHB)：紫外诱变；PHB解聚酶；生物降解 Abstract much commercialand Poly(3-hydroxybutyrate)(PHB)are attracting academicinterestassubstitute for derived non-degradable petrochemically becauseoftheirsimilarmaterial toconventionM plastics properties plastics and natural under environment． completebindegradability ne to PHB is distributedbacteriaand abilitydegrade widely among and onthe of secretion PHB fungi depends