脓毒症血清细胞因子与肝脏功能及其线粒体损伤相关性与研究.pdfVIP

广州医学院硕士论文 脓毒症血清细胞因子与肝脏功能及其线粒体损伤的相关性研究 脓毒症血清细胞因子与 肝脏功能及其线粒体损伤的相关性研究 硕士研究生：张 宇 导 师：曾其毅 教授 专 业：儿科学 中文摘要 目 的 脓毒症（sepsis ）是感染引起的全身炎症反应综合征（Systemic inflammatory response syndrome ，SIRS），其本质是大量细胞因子和炎症介质释放导致的宿主自身 免疫性损伤，进一步发展可导致脓毒症休克、多器官功能障碍综合征（Multiple organ dysfunction syndrome ，MODS ）等严重的并发症。虽然有抗生素的广泛应用，但MODS 的死亡率仍然很高，是危重病医学领域的难题。随着分子生物学的快速发展，人们 已逐步认识到，机体对感染的反应最终表现在细胞、组织、器官和整体层次上。肝 脏是机体进行物质和能量代谢的重要器官，且脓毒症早期肝脏功能及其线粒体极易 受损伤。因此本课题通过检测和观察脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10 水平变化 和肝脏功能、形态及其线粒体变化，从而研究脓毒症大鼠血清细胞因子水平与肝脏 功能及其线粒体损伤的相关性，探讨血清细胞因子水平对肝脏功能及其线粒体损伤 可能的机制，为预防和诊治脓毒症肝脏损伤提供实验参考。 方 法 1. 建立动物模型及分组 脓毒症模型采用腹腔注射 10mg/kg LPS 建立。80 只无特定病原体(Specefic Pathogen Free ，SPF) 级SD 雄性大鼠随机分为8 组：正常对照组（n=10 ）：腹腔注 射等容量的生理盐水；实验组（n=70 ）：分为LPS 注射后3、6、12、24 、36、48 、 - 2 - 广州医学院硕士论文 脓毒症血清细胞因子与肝脏功能及其线粒体损伤的相关性研究 72 小时7 个时间点，每个时间点10 只（n=10 ），腹腔注射LPS10mg/kg 。 2. 检测指标及方法 2.1 大鼠一般情况 观察正常对照组大鼠和注射LPS 后3h、6h、12h、24h 、36h、48h 和72h 组大鼠 的精神状态、有无腹泻、竖毛、皮肤粘膜出血的情况，并测量肛温、心率和呼吸频 率，检测血浆LPS 水平。 2.2 大鼠炎症反应指标 运用双抗体夹心酶联免疫吸附分析法（ELISA 法）检测正常对照组大鼠和注射 LPS 后3h、6h、12h、24h 、36h、48h 和72hLPS 组大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10 和 MBL 的浓度水平。 2.3 大鼠肝功能指标 肝功能指标：运用全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT 、AST 、LDH 、TG、HDL 和LDL 水平。 2.4 大鼠肝脏组织病理切片观察 2.5 大鼠肝脏组织切片凋亡原位末端标记检测凋亡率 采用TUNEL 法进行检测。 2.6 大鼠肝脏组织粒体损伤相关指标 采用差速离心法提取大鼠肝脏线粒体，JC-1 染料染色，流式细胞仪检测线粒体 肿胀程度和线粒体膜电位。电镜观察大鼠肝脏线粒体损伤状况，按照 Flameng 分级 方法对线粒体进行半定量评分。 3. 统计方法 获得的数据 SPSS13.0 统计软件分析，结果用均值±标准差( ±s)表示；多组间 比较采用单因素方差分析，在多样本均数比较差异具有统计学意义时进行均数两两 比较，方差齐性者采用LSD 法分析组间差异，方差不齐者采用 Games-Howell 法分 析组间差异；重复测量资料采用重复测量方差分析；相关分析采用Pearson 进行检验； α值界定为0.05 。 - 3 - 广州医学院硕士论文 脓毒症血清细胞因子与肝脏功能及其线粒体