结核分枝杆菌CFP-10单克隆抗体的研制与初步鉴定.pdfVIP

ISSNl007—8738细Ij乜j分 J免嫂学尔忠 (ChinJ 、1 Ii11r ． I ll43 · 论著 · 文章编号 ：1007—8738(2009)12—1143—03 结核分枝杆菌 CFP-10单克隆抗体的研制与初步鉴定 申峻松 一，张 辉 ，张成全 ，潘志明’，殷月兰 ，焦新安 (扬州大学 汀苏省人兽共患病学重点实验窜，江苏畜牧兽医职业技术学院畜牧系，江苏 扬州225009) Preparationandchraacterizationofmort- 抗体(mAb)。方法：应用淋巴细胞杂交瘤技术，以晕组菌 BL21(DE3)一pET一30a(+)一lhp原核表达的融合蛋白His—CFP— oclonal antibodies specific for CFP-10 l0作为抗原免疫BALB／c小鼠，以纯化的融合蛋 白GST—CFP一 proteinof Mycobacterium tuberculosis 1O作为检测抗原，制备抗结核分枝仟菌CFP一10mAb；采用问 接 ELISA、Dot．ELISA和 restem blot鉴定 mAb的特异性 SHEN Jun—song，ZHANG Hui，ZHANG Cheng—quan， 结果：获得2株稳定分泌抗结核分枝杆菌CFP一10mAb的杂交 PANZhi—ming，YIN Yue·lan，JIAOXin—tin 瘤细胞株 6E8、2E7，其 Ig亚类 分别为 IgGl、lgG2b。mAb JiangsuKeyLaboratouofZoonosis，YangzhouUniversity，Yang— 6E8、2E7腹水的ELISA效价分别为1：1000000，1：1024000 zhou225009，China 在 Dot—ELISA试验 中，这 2株 mAb均只与表达 His—CFP一10及 lAbstractI AⅡⅥ：T0preparemonoclonalantibodies GST—CFP一10的重组大肠杆菌反应，与其他 5种菌株均不发生 (mAb)againstCFP一10proteinofMycobactenum tuberculo— 反应。在Westernblot试验中，2株mAb只与 CFP一10蛋 白发 ss『．METHODS：BALB／c micewere immunized with the 生反应，出现特异性条带。结果表明，mAb6E8、2E7足针对 purified His·CFP—l0 expressed in BL2l fDE3)一pET·30a 结核分枝杆菌CFP．10的特异性mAb。结论：成功地制备抗结 (+)-Ihp．With thepurifiedGST·CFP一10 asdetectinganti— 核分枝杆菌CFP一10的mAb，它们在结核分枝杆菌诊断和致病 gen，mAb—producedhybridomacellsagainstCFP一10were 机理研究等方面有重要应用价值。 screened by indirectELISA．The specificity ofthe mAbs [关键词]结核分枝杆菌；CFP一10；单克隆抗体 werecharacterizedbyindirectELlSA．Dot—ELlSAandWest— [中图分类号]11392．1l [文献标识码]B ern blot． RESULTS：Two hyridoma celllines secreting mAbsagainstCFP一10named6E8．2E7wereob