紫杉醇与顺铂合用对卵巢癌细胞凋亡的影响.pdf

中文摘要 紫杉醇与顺铂合用对卵巢癌细胞凋亡的影响 摘 要 目的：卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统三大恶性肿瘤之 一，严重危害妇女的身心健康，其发病率和死亡率仍在逐年 上升。目前，肿瘤的治疗提倡手术、化疗、放疗等一起的综 合治疗，以最大限度的减少治疗的副作用，改善患者的生活 质量，延长生存年限。由于许多患者发现时已较晚，加上肿 瘤的转移和复发特点，手术治疗的效果并不理想，因此化疗 在恶性肿瘤的治疗中占据着十分重要的地位。研究表明，化 疗药物均可通过诱导细胞凋亡而发挥抗癌作用，对靶细胞凋 亡的诱导能力常常是筛选抗癌敏感性化疗药物最客观的指 标。近年来，随着细胞分子生物学和肿瘤生物学的研究进展， 人们逐渐认识1111中瘤是一类细胞周期疾病，细胞周期的调控 在肿瘤的发生、发展中起到重要作用，许多化疗药物也是针 对细胞周期某一时相发挥作用，阻滞细胞周期的正常运行， 从而达到抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡之目的。根据化疗药 物作用于细胞周期时相的不同，将其分为周期非特异性化疗 药和周期特异性化疗药。顺铂为细胞周期非特异性化疗药， ’在卵巢癌的治疗中一直是首选药物，但目前随着顺铂的广泛 应用，其耐药现象日渐突出，使它的使用受到很大限制，因 此，选择合理的与之配伍的药物是提高其疗效的关键。+紫杉 醇可导致G2／M期阻滞，并促进细胞凋亡，它是一种新型抗微 管药物，可使微管过稳定化及OlIN异常，从而发挥抗肿瘤作 用，在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等肿瘤中已有应用。目前， 中文摘要 卵巢癌的化疗常选择以顺铂为主的联合化疗，而紫杉醇也成 为卵巢癌化疗中常用的药物。理论上，对不同细胞周期起作 用化疗药联合应用可增加药物对细胞周期的阻滞作用，加强 对癌细胞的杀伤力。本实验将通过体外研究从凋亡及细胞周 期动力学角度探讨紫杉醇与顺铂合用对卵巢癌SKOV3细胞 生长的影响：MTT比色法测定顺铂单用及两者合用对卵巢癌 SKOV3细胞的增殖抑制率；流式细胞仪分析细胞周期的变 化以及细胞凋亡情况；免疫细胞化学检测细胞周期因子 果进行统计学分析，了解三种因子在细胞凋亡中所起的作 用，进一步探讨紫杉醇和顺铂合用引起细胞凋亡变化的可能 机制，为临床制定合理的联合化疗方案，寻求最佳治疗效果 提供理论依据。 方法： 00 养，内含1O％新生牛血清、青霉素100U／ml、链霉素1 ug／ml。置37℃、5％C02环境下培养。 2MTT法检测药物对卵巢癌细胞的抑制作用 2．1药物浓度选择、实验分组 ug／rnl，DDP为3ug／ml，进行实验分组。实验组：(i)DDP 组：分别用DDP的1／5倍血浆峰浓度，血浆峰浓度浓度，5 Paclitaxel的血浆峰浓度浓度分别与DDP的上述三种浓度合 用。同时设空白对照组。 2．2MTT法检测及结果分析 中文摘要 取对数生长期细胞，O．04％EDTA消化后加培养液吹打 100ul细胞悬液，置于C02培养箱中，24小时后加入经无血 Ou 清培养液稀释的药物1 1，不同的药物及浓度均加3复孔。 IX IXlDMSO 1．继续孵育4小时，离心吸去上清，每孔加入200 液终止反应。用酶标仪测490nm波长的吸光值(A值)，．．同 时设空白对照孔。根据公式：(对照孔A值一用药孔A值)／ 对照孔A值×100％，计算细胞增值抑制率。利用金氏公式 判断两药的合并用药效应。其中金氏公式为： Q=E(a+b)／Ea+Eb—Ea．Eb。 3流式细胞仪检测不同药物浓度下的SKOV3细胞凋亡率以 及细胞周期分布变化 3．1流式细胞仪检测不同药物浓度下细胞周期分布变化 取对数生长期细胞，换液后加入经无血清培