《自然》新方法解决癌症50年纷争-WesternBlot中的新仪器.pdfVIP

Western Blot 中的新仪器（Updated） 二十年来，Western blot 的步骤一直都没有什么大的改变，大家还是沿用分子克隆上的技术和 试剂。不过，幸好有一些新产品不断涌现，能大大提高我们的实验效率和效果。现在Western blot 中的趋势是荧光和化学发光检测、准确定量蛋白、自动化操作、自动冷却转印系统和CCD 成像系 统。大家一直以来可能关注试剂比较多，不过下面提到的这些新仪器，也可以让Western blot 更快 速、更方便呢。 让转膜不再沉闷 的价格在2 万元人民币左右，作为仪器来说 不算贵，不过那个凝胶转印堆积层可是一次性 其实Western blot 的原理看起来非常简 的，需要反复购买，价格约是100 多一块吧。 单，但就是过程很漫长，电泳、转膜、封闭、 孵育，每一步都得花一两个小时。如果只是偶 CCD 成像系统 尔为之还好，但那些WB 达人，几乎天天做， CCD表示电荷耦合装置，它是由一种高 就不知要奉献多少宝贵青春了。如果现在告诉 感光度的半导体材料制成，能把光线转变成电 你有一种转膜方法，只需要7 分钟，你是不 荷。随着冷却CCD技术的发展，成像系统成 是会很开心。Invitrogen 的干式转印仪iBlot 本越来越低，因而在现在的实验室里这些设备 就真的做到了这一点。插一句，Invitrogen 的 越来越普遍。目前几乎所有Western blot 的新 转印仪叫iBlot，核酸纯化仪叫iPrep，不知道 技术都是针对CCD成像系统的，它代替了传 它们和苹果的iPhone、iPod 有没有关系。iBlot 统的胶片成像。胶片成像虽然比自然发光法灵 是一台干式转印仪，无需配制任何缓冲液，只 敏度更高，但也有很多缺点：耗时，需要暗房 需要5-7 分钟就能将蛋白转到NC 膜或PVDF 和显影剂，胶片很贵，而且是一个消耗品，需 膜上。iBlot 能实现如此快的转印，是因为iBlot 要持续购买。另外，用胶片上的蛋白条带进行 转印仪和凝胶转印堆积层的配合，可以产生高 定量几乎是“不可能的任务”，和目测一块考马 电场强度。凝胶转印堆积层（包括Top 和 斯蓝染的胶没什么区别。冷却型CCD照相机 Bottom 两块）中含有阳极和阴极，缓冲液和 与X胶片相比具有瞬时影像处理、高灵敏度、 膜（NC 膜或PVDF 膜），你只需放入你的胶 高分辨率、动力学范围广等优点，而且还不需 （Tris-Glycine、Tricine 或NuPAGE 胶都可 要胶片处理装置及暗室。然而，这项技术要求 以），赶走气泡，就可以开始转印了，再也不 底物能产生高强度长持续时间的信号，以被照 需要配制大量的缓冲液+等待2 个小时，可同