L—H类似物构象的荧光光谱学研究HR.pdfVIP

． 第24卷 第i期 生物化学与生物物理学报 Vo】 24．No．1 2995年1月 ACTA BIOCHI~IICA etBIOPHYSIGA 8IN卫0A Jan．．1992 LH—RH类似物构象的荧光光谱学研究 ． 堕鏖盛 夔 ＼／，邱秀娣 龚岳亭 (中国科学院上海生物化学研充所．2ooos~) ，z 关鼢坚型 ：动态荧辩灭袖錾一锄 魂 下丘脑活性肽 LH-RH 的类似物 [I}-ila，De棚 ly_NH；。]-LⅡ一RⅡ一EA， 以下简 称 LH—RtI-A，是不含有游离氨基和羧基的由9种不同类型的氨基酸所组成的九肽。令 人感兴趣的是此活性肽中含有单一的色氨酸(Trp3)和酪氨酸(Tyr)荧光发色团 且色氨 酸倍在其活性中心区域。因此利用荧光方法来研究 LⅡ一RⅡ一A 在溶液中的构象是 非 常 有意义的。本文 以LH-RH—A为主要对象，研究了它的荧光特性并和LH—RH 及其某 些类似物如 [D r I-LH—RH、 [Trp 卜LH-RH 等进行了比较。研 究 的结 果表 明， LH-RH—A在溶液中具有一定程度的构象，分子 中的Trp和 Tyr残基可发生能量传递。 我们还发现 LH-RH 及其类似物的活性中心 Trp。附近略带正电性，其正电性的大小与 活性成正相关，这意味着在人工合成高效LH—RH 类似物或颉抗物时可通过改变这一区 域的正电性来实现 材 料 和 方 法 1．材料 LH-RH-A、LH-RH、[D-Trp 卜LH-RH 和 [Trp 卜LH—RH 均由我 们 实验室台成[{L_色氨酸、甘氨酸系中科院上海生物化学研究所东风生化试剂厂生产； KNO 、(Is01 Hal Na0H、Tris等化学试剂均为分析纯级；所有溶液均用去离子水经 、 、 重蒸后配制；文中凡没有特别指出的溶液均为 0．05mol／LTris-H01，pH7．5标准缓冲 液；pH9．0~II0溶液系用 0．05mol／L甘氨酸加入适量 1mol／LNaOH 溶液配制而成； 实验 中的LH—RH—A等样品溶液均先以标准缓冲液配制成 1mg／n1l的浓溶液。经注射 器微型Millipore(0．45 )过滤后待用。 2．方法 荧光测量在 日产 MPF4 型荧光分光光度计上进行。激发波长 和发射 波长的带宽分别为 3．O和 1．5rim。文中的荧光谱均未经过光谱校正 故测得的色氨酸 k 等参数与校正过的k 有一定差异。NOi、as对 LH-RH-A等的动态荧光 淬灭 中的Stern—Volfiler常数 由Stern—Volmer公式得之 o 本文 ：I990年 1月9 日憧至，修改稿 1991年 3月 02日收到． 1期 LS-RII类似物构象的荧光光谱孝研究 结 果 和 讨 论 一 L丑．_R丑l_A 的荧光谱 、 图1显示了LH—RH-A在标准缓冲液中的荧光发射谱 (曲线0)。与在同样缓冲液 中的自由I厂色氨酸的荧光谱相比较 (曲线a)，LH-I~H—A 的荧光谱有一定的 “蓝移”．其最 大发射波长 ^ 为 352Dm，而 自由Trp的k 在 $60 ：ilm，两者相差近 8nm。众所周知，Trp的荧光发射谱 与其周围介质的极性有关，当介质的极性增强时其荧 光谱会发生 “红移”，反之刚发生 “蓝移”。由L]：[-RH-A 荧光谱的 “蓝移”可 以得知：LW-RH-A 中Trp。的侧 链周围的极性是有别于 自由Trp在水相 中的情 况， 即Tr 的侧链并没有完全暴露于水分子中，而 是在 某种程度上被 “屏蔽”在一定的构象之中。但其周围的 极性还是较强的，因为其 … 的蓝移仅有 8rim左右。 上述的这种构象可能还是比较稳定的，因为从动态荧 光淬灭的结果看 (详见下文)，NO{和O8淬