【论文】细胞融合与单克隆杂交瘤技术.docVIP

细胞融合与单克隆杂交瘤技术 一、细胞融合 细胞融合(cell fusion)，是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备，膜蛋白的研究。 1、基本介绍 通过培养和诱导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cellfusion）或细胞杂交（cellhybridization）。 同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合；异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱发融合。 诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电激和激光）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusionprotein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。 常见的细胞融合剂。 有性繁殖时发生的精卵结合是正常的细胞融合，即由两个配子融合形成一个新的二倍体。在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。 2、发展简史 20世纪30年代，科学家们相继在肺结核，天花，水痘，麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。 20世纪70年代，科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象，但是当时科学发展水平的限制，没有给予足够重视。 1962年，日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。 1965年，英国科学家进一步证实了灭活的病毒在适当的条件下也可以诱发动物细胞融合。 后来科学家又成功诱导了不同种动物的体细胞融合，并且能将杂种细胞培养成活。细胞融合技术不断改进，现在已广泛应用于细胞学，遗传学，免疫学，病毒学等多种学科的研究工作中。 3、实验操作（以人鼠细胞杂交为例） 　　 　　人、鼠细胞融合实验分三步进行首先用荧光染料标记抗体将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合；第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合；最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中，让这些标记抗体同融合细胞膜上相应的抗原结合。开始,融合的细胞一半是红色,一半是绿色。在37下40分钟后,两种颜色的荧光在融合的杂种细胞表面呈均匀分布，这说明抗原蛋白在膜平面内经扩散运动而重新分布。这种过程不需要ATP。如果将对照实验的融合细胞置于低温(1)下培育,则抗原蛋白基本停止运动。这一实验结果令人信服地证明了膜整合蛋白的侧向扩散运动 ③抗体的检测 ④杂交瘤细胞的克隆化 ⑤大规模培养——批量生产单克隆抗体 4、单克隆杂交瘤技术的应用 ①疾病的论断和治疗(生物导弹) ②生物大分子的鉴定、定位和分离纯化 ③细胞器的鉴定、定位和分离 ④特定细胞或病毒的鉴定、定位和分离