p38+MAPK信号转导通路在肠道病毒71型感染中的作用机制的实验研究.pdfVIP

2 p38MAPK 信号转导通路在肠道病毒71 型感染中的作用机制的实验研究 中文摘要 p38 MAPK信号转导通路在肠道病毒71 型 感染中的作用机制的实验研究 中文摘要 目 的：探讨肠道病毒71型（EV71）体外感染人树突状细胞（DCs）后启动免疫 应答反应的机制，研究p38 MAPK 信号通路在EV71 感染中的作用，为寻找新的药物 作用靶位奠定实验基础。 方 法：人横纹肌肉瘤（RD）细胞扩增EV71并测定病毒滴度。健康成人外周血 单核细胞诱导衍生获得DCs，流式细胞仪检测DCs 表面分子的表达；混合淋巴细胞 反应（MLR）检测病毒感染后的DCs 对初始T 细胞的刺激活性；PCR 芯片分析DCs 感染EV71 2h和8h后CD 分子、细胞因子及p38 MAPK 信号通路相关分子基因差异 表达；Luminex 液相芯片技术检测培养细胞上清液中细胞因子的含量；Western blot 法检测p38MAPK、c-Fos、c-Jun等信号通路关键分子的蛋白表达水平和磷酸化水平， 以及p38MAPK信号通路抑制剂（SB203580）对EV71/VP1 表达水平的影响。 结 果：流式细胞仪检测结果显示DCs 高表达特异性分子标志CD83、CD80、CD86 和HLA-DR，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激的DCs 具有诱导初始T 淋巴细胞增殖 的能力；PCR 芯片显示EV71感染2h和8h 后p38 MAPK 信号通路分子相关基因表 达发生明显变化，部分基因上调2.02-5.57 倍；加入抑制剂SB203580后DCs 分泌白 细胞介素（IL）-1α、IL-6、IL-12、TNF-α的水平明显下降（P0.05，α=0.05）；EV71 感染激活p38 MAPK 信号通路。与加毒组相比，SB203580可明显下调p38 MAPK 激 酶的磷酸化水平（P0.05，α=0.05），转录因子c-Fos、c-Jun 的蛋白磷酸化水平也明 显受抑（P0.01，α=0.01）。与对照组相比，感染组细胞病毒蛋白VP1 的表达量明显 升高，加入SB203580后，VP1 表达水平下降（P0.05，α=0.05）。 结 论：EV71感染能增加DCs 活力，延长其存活时间，促使其活化并分泌细胞 因子，启动宿主细胞相应的免疫应答；DCs 中p38 MAPK信号通路的激活参与了EV71 的复制过程。 I 中文摘要 p38 MAPK 信号转导通路在肠道病毒71 型感染中的作用机制的实验研究 关键词：p38MAPK；信号通路；肠道病毒71型；树突状细胞 作 者：彭宏君 指导老师：史伟峰 II p38MAPK 信号转导通路在肠道病毒71 型感染中的作用机制的实验研究 英文摘要 TheExperimentalStudyoftheEffectandMechanismof TheExperimentalStudyoftheEffectandMechanismof TThheeEExxppeerriimmeennttaallSSttuuddyyoofftthheeEEffffeeccttaannddMMeecchhaanniissmmooff p38MAPKSignaling Transduction Pathwayon p38MAPKSignaling Transduction Pathwayon pp3388MMAAPPKKSSiiggnnaalliinnggTTrraannssdduuccttiioonnPPaatthhw