高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤.docVIP

高效液相色谱法同时测定食品中苯甲梨酸脱氢乙的μm) （2）流动相：甲醇—0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（10:90） （3）流速：1.0ml/min （4）进样量：10μL （5）检测波长：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm（脱氢乙酸） 1.4样品处理 1.4.1 固体样品（如熟肉制品.豆制品及糕点类） （1）称取捣碎混匀的样品5g ( 精确至0.01g ) 于具塞三角瓶中， 精密加入25ml提取溶剂，振荡1h后，于4℃放置24h ， 离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。 1.4.2 液体样品( 如冷冻饮品) 将样品于室温下解冻后，称取10g ( 精确至0.001g ) 于25ml 量瓶中， 用提取溶剂定容至刻度，混匀，于4℃放置24h ， 离心，取上清液3ml ，用水定量稀释至10ml，离心，经 0.45μm滤膜过滤， 进液相色谱仪分析。 2数据处理 2.1标准曲线与检出限 精密量取标准储备溶液适量，用提取溶剂定量稀释制成每ml中含0.1μg,0.5μg,1μg,4μg,8μg,12μg,16μg,20μg的标准混合溶液，按前述色谱条件进行测定， 且每个浓度做两组平行试验，以浓度C(μg/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标制作标准曲线； 标准混合溶液的浓度（μg/ml） 0.1 0.5 1 4 8 12 16 20 峰面积 以浓度C(μg/ml) 对峰面积A进行线性回归，按信噪比3，计算检出限 2.2 精密度和方法回收率试验 （1）精密度实验： 取同一对照品溶液( 各浓度均为10μg/ml ) ，重复进样，测出各峰面积的 RSD值。 相对标准偏差(relative standard deviation RSD)，又称为变异系数（Coefficient of variation,C.V.），通常用百分数表示用来评价定量分析结果精密度的量度，是对同一样品多次测定结果的重复性和再现性的评价。本实验采取8次样品的结果测定而计算最后测得数据的RSD。RSD计算如下公式： 其中： ——标准偏差(Std Dev,Standard Deviation) ——n次测定值的算术平均值 精密度的测定通过测定多组数据而测定标准偏差来评价，本方法通过测定10μg/ml的对照品溶液测定9组，且每组做2个平行； 样品名 峰面积 (μS*min) 浓度 (mg/L) 精密度10μg/ml-1 精密度10μg/ml-1 精密度10μg/ml-2 精密度10μg/ml-2 精密度10μg/ml-3 精密度10μg/ml-3 精密度10μg/ml-4 精密度10μg/ml-4 精密度10μg/ml-5 精密度10μg/ml-5 精密度10μg/ml-6 精密度10μg/ml-6 精密度10μg/ml-7 精密度10μg/ml-7 精密度10μg/ml-8 精密度10μg/ml-8 精密度10μg/ml-9 精密度10μg/ml-9 将每两组平行实验结果取平均值且通过计算出来的平均值通过excel计算出其标准偏差s 样品名 各组平行实验浓度平均值(mg/L) 平均值 标准偏差 精密度10μg/ml-1 精密度10μg/ml-2 精密度10μg/ml-3 精密度10μg/ml-4 精密度10μg/ml-5 精密度10μg/ml-6 精密度10μg/ml-7 精密度10μg/ml-8 精密度10μg/ml-9 = （2）回收率实验： 准确度的计算通过测定加标回收率,配制一定浓度水平的混合标准溶液，按8mg/kg,10mg/kg,12mg/kg的量加入样品中,且每个浓度做3组，每组均做2个平行试验，使数据更为精准。按1.4方法处理，做回收率试验 样品名 峰面积 (μS*min) 浓度 (mg/L) 回收率8mg/kg-1 回收率8mg/kg-1 回收率8mg/kg-2 回收率8mg/kg-2 回收率8mg/kg-3 回收率8mg/kg-3 回收率10mg/kg-1 回收率10mg/kg-1 回收率10mg/kg-2 回收率10mg/kg-2 回收率10mg/kg-3 回收率10mg/kg-3 回收率12mg/kg-1 回收率12mg/kg-1 回收率12mg/kg-2 回收率12mg/kg-2 回收率12mg/kg-3 回收率12mg