黄颡鱼金属硫蛋白cDNA克隆及原核表达.pdfVIP

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2017-09-02 发布于安徽
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黄颡鱼金属硫蛋白cDNA克隆及原核表达.pdf

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摘要摘要金属硫蛋白普遍存在于生物体内，具有低分子量、富含半胱氨酸、诱导性强等特点。金属硫蛋白具有很强的金属结合能力和氧化还原能力，在生物体内参与细胞内金属水平的稳态调节、重金属解毒、清除自由基、抵抗电离辐射等，具有较强的生物学功能。长381 Frame，ORE)长度为183 kb，开放阅读框(OpenReading bp，可以编码60个氨基酸，聚类分析表明黄颡鱼MT与斑点叉尾鲴MT氨基酸序列相似性最高(91％)。理论分子 X 基酸序列进行分析发现该序列有脊椎动物金属硫蛋白的保守序列模式cys．X．cys、cys…X 值得方式进行分析，表明MT会受到Cd2+的诱导表达并与其浓度相关，MT在肝脏中表达量相对较高。本论文采用基因重组技术，将黄颡鱼MT基因重组入原核表达载体pMAL．c2x中，该载体含有一个麦芽糖结合蛋白(MBP)基因，便于融合蛋白表达后的纯化。将重组质 BL2 粒转入最coli 化MT的大肠杆菌BL21与对照相比，对重金属耐受性都得到了增加。关键词：黄颡鱼，金属硫蛋白，eDNA，克隆，半定量PCR，原核表达 Abstract Abstract lowmolecular metal—binding Metallothioneins(MTs)ale foundina of functionssuchas importantbiological proteins varietyorganisms．MTsplay role eXCeSSreactivemetal radical andreservoir against heavy ions，free scavengers protective thatCanhedonatedtoother were ofessentialmetals tobeinvolvedindetoxification stress． by suggested processestriggered MT Inthis cDNA Wascloned full—lengthsequenceencoding byhomologous paper,a from cartfish eDNA cloneandRACEmethodYellow Pelteobagrusfulvidraco．Thissequence 1 in a183 encodes60aminoacid is38 frame，which bp length，containingbpopenreading aminoacid showedmorethan o