环糊精流动相添加剂分离色氨酸对映体的薄层色谱法.pdfVIP

环糊精流动相添加剂分离色氨酸对映体的薄层色谱法* 黄慕斌 李洪宽 （山东大学化学系 济南 250100） 提要 用 环糊精 é（CD）作为流动相手性添加剂，在聚酰胺薄膜上分离2,4二硝基苯基色氨酸(DNPTrp)对 映体，流动相最佳组成：CD尿素饱和溶液-甲醇 甲酸(9:1 2,V/V/V),还分离了非对映异构体辛可宁和辛 可尼丁以及邻、间、对硝基苯胺。 关键词 薄层色谱，色氨酸，对映体分离，手性展开剂 1 前言 3 结果与讨论 由于环糊精具有特殊的笼形结构，分子中含有 3.1DNP-Trp对映体的分离 多个手性碳原子，所以在毛细管气相色谱[5]和高 甲醇作为有机改性剂，-CD作为流动相中手性 效液相色谱 (HPLC)[6中已被广泛应用于分离和 添加剂，乙酸作为酸碱调节剂。流动相中甲醇和 - 分析许多位置异构体和对映体。在薄层色谱(TLC) CD尿素饱和溶液不同配比对几种DNP-DL氨基酸 中虽有环糊精作为手性键合相的报道[8]，但更多的 分离影响见图1。图1显示DNP-Trp对映体在甲醇 还是作为手性流动相使用[9],Armstrong等[]曾在 含量小于40％时获得分离，其他DNP-DL氨基酸不 聚酰胺薄膜上用a-CD分离了苯甲酸及其取代的位 能分离。甲醇含量太少时斑点拖尾分离不好，甲醇含 量以控制在10 30％为宜。 置异构体。本文在聚酰胺薄膜上，用 CD分离了 DNP-Trp对映体和辛可宁、辛可尼丁以及硝基苯胺 的位置异构体。 2 实验部分 2.1 试剂和材料 聚酰胺薄膜 浙（江黄岩化工厂）；-CD 陶湾化 工厂）;2,4-二硝基氟苯 （自制）；辛可尼和辛可尼丁 进（口分装）；DL和L-Trp均为分析纯；其它试剂均 为AR级。 2.2 2,4-二硝基氟苯色氨酸 D（NP-Trp）的制备 2mmol/L,Trp溶液溶解于 OmL0.5mol/L t= .D DNPThr,2.DLDNPLeu, Na2CO3溶液中，在40 水浴中加热 1Omin后加入 3.DLDNPVal4.DNPTrp 2mmol/ 的2,4-二硝基氟苯的四氟呋喃(THF)溶 Thr:苏氨酸，Leu亮氨酸,Val：缬氨酸,Trp：色氨酸 液，继续反应 1min，取出冷却，加浓HCI酸化，立即 用四氢呋喃(THF)代替甲醇，其他条件同图1, 有黄色沉淀产生，过滤，用乙醚-石油醚重结晶，即得 THF含量在。 20％时DNP-Trp对映体获得分离。 与甲醇相比较，甲醇优于THF使用浓度范围大，斑 纯品。 2.3 展开和检测 点扩散小，分离效果好。 聚酰胺薄膜大小为7.5 2.5cm,展距6.Ocm, 甲酸可代替乙酸作为酸碱调节剂，与乙酸一样， 含量低时斑点拖尾严重，含量达 20％时斑点不拖 DNP-Trp和硝基苯胺利用其 自身颜色检测。辛可宁 尾。图2为甲酸存在下，饱和-CD和甲醇的不同配 和辛可尼丁用荧光检测。 *山东省自然科学基金资助项目 本文收稿日期:1994年 6月16日，修回日期：1994年9月1日 比对DNP-Trp对映体分离的影响。由图中可看到， 对映体分离因子a也随之增加。用饱和-CD尿素 甲醇在 4% 范围内时，对映体获得分离，当流动 溶液分离效果最好，见图4a。 相组成为：饱和-CD尿素溶液 ：甲酸 ：甲醇=9： 3.2非对映异构体的分离 2 时，DNP-Trp对映体获得最好分离。随着甲醇