一种妇科实体肿瘤细胞原代培养新方法同源底物法HomogeneousSubstrateMethodANewMethodforP.pdfVIP

遗传HEREDITAS(Beijing)17(6):28-291995 ·实 验 技 术 与 方 法 · 一种妇科实体肿瘤细胞原代培养新方法一一同源底物法 朱 丹① 马梅荪 赵荣枝 李牧尧 新（获医学院生物教研室，乌鲁木齐 830054) HomogeneousSubstrateMethod:ANewMethodforPrimaryCell CultureofGynecologicalSolidTumor ZhuDan(Z MaMeisun ZhaoRongzhiLiMuyao (DepartmentofBiology,XinjiangMedicalCollege,Urumqi,Xinjiang830054) 自1952年Gey等 ’（）建立第一个人肿瘤细胞系即HeLa细胞系以来，细胞培养技术已日趋完善并广泛应用于 肿瘤细胞生物学和遗传学等各项研究领域，成为制备良好研究材料的有效途径．然而就实体瘤细胞原代培养来说， 现有的方法成功率仍很低，有待改进．我们从培养液和底物的选择人手，经摸索建立了一种适用于妇科实体肿瘤细 胞原代培养的简单有效方法，称之为 同‘源底物法”． 1方 法 介 绍 1.1手术切除肿瘤后立即取材，并置于含Hanks液的无菌瓶内． 1.2取少许标本碎渣，置玻片上，在显微镜下观察．如见瘤细胞体积大、折光性强且多聚集成串图（版1,a)，提示瘤 细胞活性 良好，反之则可弃去标本． 1.3剔除非肿瘤组织，将瘤组织剪成 1-3mm3大小，加人0.1-0.5mg/ml胶原酶培（养基配制），混匀后将悬液分 装于多个培养方瓶中，塞紧瓶塞，竖立放置瓶（口端向上），室温中消化12-16小时，其间不时摇动培养瓶，使不断消 化下的零散细胞和间质附于瓶底面上．消化结束后将消化液连同细胞吸入离心管中．旁置方瓶，让瓶底面上残留 细胞和间质干涸，作为下一步培养细胞贴附用的同源底物． 1.4将细胞悬液离心 1000转 ／分，5分钟，收集分散的细胞．弃酶液，将细胞悬于含20％小牛血清的TC199培养 液内，形成浓度适当的细胞悬液，分种于上述消化用瓶内，平置，37C预培养24小时．此间已被分散的细胞或细胞 团常聚成大块，应将其摇散． 1.5若发现培养液变酸，部分细胞贴壁，则可将培养液换为含 100U/ml双抗、4pg/ml胰岛素、20％小牛血清， pH7.0-7.2的McCOYs5A错养基美（国GIBCO),37℃继续培养． 2结 果 作者运用此法对54例妇科原发实体肿瘤标本3（1例卵巢肿瘤和23例子宫肿瘤）进行了原代培养．其中34例 肿瘤细胞在培养4-10夭内长成单层 图（版I,a,c,d)，成功率约63 见（表1). ①目前地址：中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室，北京 100021. ,Presentaddress:MolecularOncology,CbineseAcademyofMedicalSciences,Beijing100021． 6U 朱 丹等：一种妇科实休肿瘤细胞原代培养新方法— 同源底物法 29 对25例标本 1（5例卵巢和 10例子宫肿瘤）观察了在不含 同‘源底物’的培养瓶里细胞贴壁情况．同时用 TC199和McCoys5A培养基培养，两者效果无明显差异，通常48小时后才有部分细胞贴壁 图（版1,b)，仅 10例 于7-14天内长成单层，成功率约18.5 见（表1)．对上述25例标本还比较了同‘源底物’存在情况下肿瘤细胞在 不同培养基中的贴壁效果．在McCoys5A,RPM11640和HamsF12培养基中，细胞贴壁多于48小时后，18 例于7-14天内长成单层，成功率约33.3 见（表 1)．而用TC199或附加CaC12终（浓度200mg/L）的McCoys 5A培养基培养，通常可在24小时内观察到大量细胞贴壁 图（版1,c). 表 1患者临床病理类型及实验结果 部 位 病 理 类 型 取 材 数 培 养 成 功 例 数 同源底物＋TC199 无同旅底物 同源底物十其它培养基 卵