反相高效液相色谱法同时测定桑叶提取物中芸香甙和槲皮素的含量.pdfVIP

反相高效液相色谱法同时测定 桑叶提取物中芸香甙和槲纹皮素的含量 贾之慎 邹建敏 唐孟成 浙（江农业大学 杭州 310029） 提要 用P100型高效液相色谱系统、DL-800色谱工作站、YWG-C18色谱柱，以甲醇-水-磷酸体系6（0:40: 0.4,V/V/V）为流动相分离并同时测定了桑叶提取物中芸香甙与槲皮素的含量。芸香甙、槲皮素含量与峰面积 呈良好的线性关系。芸香甙的变异系数为1.98％，回收率为104.0％槲皮素的变异系数为9.8％，回收率为 103.2％ 。 关键词 反相高效液相色谱法 芸香甙 槲皮素 桑叶 园标本区 1 前言 2.3 色谱条件 桑叶除养蚕外，其疏散风热、清肝明目、利关节、 流动相:甲醇:水:磷酸=60:40:0.4;流速 利尿、降血压等药用作用自古以来就被我国人民所 1.0mL/min;检测波长 257nm;进样量:10L;柱温 利用[1 桑 叶含有芸香甙 (rutin)、槲皮素 25 ；积 分参数:噪音 门槛 5.00V、最小面积 500.00V·s、最小峰高50.00v (guercetin)、二氢山捷萘素(dihydrokaempferol)等黄 2.4 样品处理 酮类化合物及其衍生物，据报道桑叶的药用作用和 桑叶经风干后，用粉碎机粉碎 准确称取试样 这些黄酮类化合物的抗氧化作用有关[]高效液相 色谱法在黄酮类化合物的分析中已得到了广泛的应 4g，加沸水 或（甲醇）100mL，回流30min，减压过滤 后用重蒸水 或（甲醇）定容于100mL容量瓶中备用 用3[～5]，但对桑叶中黄酮类化合物的分析尚无报道 进样前用0.45m滤膜过滤 本文报道了用反相高效液相色谱法同时测定桑叶提 取物中芸香甙和槲皮素的方法，该法简便，重现性 3 结果与讨论 好，准确度较高 实验采用国产高效液相色谱仪和色 3.1磷酸对分离的影响 谱柱，结果令人满意 以纯甲醇为流动相时，芸香甙和槲皮素不能达 2 实验部分 到基线分离 以甲醇-水 6（0:40）为流动相时，两种 成分能分离，但有拖尾现象 这是由于黄酮甙元的酚 2.1 仪器 羟基产生电离，因而在固定相表面存在着双保留机 P100型高效液相色谱系统 （中国科学院大连化 制 加入0.4％的磷酸，调整流动相pH为2.5，使酚 学物理研究所制造），由P100型高压恒流泵、UV100 羟基的电离被抑制，峰保留的主要控制因素成为中 型可变波长检测器、GJ605型高压进样阀、DL-800 性分子在反相条件下的疏水缔合，可使峰形改善 见（ 色谱工作站组成 色谱柱:YWGC18(10m,250mm 图1） ×4.6mmi.d.) 进样器配10L定量管 3.2检测波长的选择 2.2 试剂与样品 高效液相色谱法测定银杏叶中芸香甙和槲皮素 重蒸水 （自制，0.45m滤膜过滤），甲醇 色（谱 的检测波长通常为254nm